Što je PCR analiza za tuberkulozu

Antritis

Inovativna metoda za otkrivanje mikroorganizama, izumio je znanstvenik Cary Mullis krajem prošlog stoljeća - PCR analiza. Za svoje je spise dobio Nobelovu nagradu. Potpuno se taj proces naziva lančana reakcija polimeraze. Sastoji se od obnavljanja vrste mikroorganizma u dobivenom biomaterijalu pomoću kratkih DNA fragmenata. To vam omogućuje da otkrijete infekciju u ranom stadiju i odmah započnete liječenje, bez da dođe do ozbiljnih simptoma i komplikacija.

Što je analiza

Dijagnoza PCR-om je dobivanje segmenata patogene DNA iz biološkog materijala i njihovo poravnavanje u ispravnom lancu. To omogućuje identifikaciju mikroorganizma kojem pripadaju stanice.

Postupak se provodi u tri faze:

  1. Prikupljanje biološkog materijala.
  2. Identifikacija i poravnavanje DNA.
  3. Prepoznavanje infekcije.

Ova studija zahtijeva posebnu medicinsku opremu - pojačavajuću. Opremljen je kamerom, u kojoj je ispitivani materijal u interakciji s visokim temperaturama i kemijskim enzimima. Na izlazu, laboratorijski tehničar ima dugački lanac DNA uzročnika, ako ga ima u ljudskom tijelu.

Kako se pripremiti za dijagnozu

PCR analiza je složen proces genetskog inženjeringa koji zahtijeva točnost i ozbiljnost laboratorijskih tehničara i pacijenata. Veliku ulogu u ispravnosti rezultata analize ima priprema za postupak, odnosno ispravno prikupljanje materijala.

Glavni izvori informacija o bolesti su:

Mogu se koristiti i druge opcije, tekućine, ako je potrebno, uzimaju se za analizu iz različitih organa.

Za pacijenta postoje određena pravila koja se moraju slijediti prije postupka. Ako postoji krvna slika, zabranjeno je 8 sati prije prikupljanja:

  • jesti hranu;
  • pušiti;
  • Piti alkoholna pića;
  • uzmite lijekove unutra.

U večernjim satima, prije sakupljanja sputuma, lijek se pije da bi se razrjeđivao i olakšavao iskašljavanje. Ujutro sakupite materijal nakon temeljite higijene usne šupljine.

Urin se skuplja u jutarnjem sterilnom staklu na prazan želudac, nakon pranja, prije uzimanja bilo kojeg lijeka.

Ako osoba uzima antibiotike, analizu lančane reakcije polimeraze treba odgoditi, inače rezultat PCR-a nije pouzdan. Sputum ili krv treba darivati ​​dva tjedna nakon završetka liječenja.

Kako proces identifikacije bakterija

Ukratko, postupak je izolirati dio DNA. Upotreba suvremenih metoda genetskog inženjeringa omogućuje nam da odredimo vrstu mikroorganizma. Štoviše, materijal za analizu treba malu količinu.

Tehnički, to je vrlo kompliciran postupak, ali je potrebno manje vremena nego klasične bakteriološke studije. Patogeni se ne moraju izolirati od biomaterijala, nema potrebe da se uzgajaju nekoliko tjedana. Na dan isporuke pacijent može već znati rezultate svoje analize.

Cijeli proces PCR-a odvija se u fazama:

  1. U tijeku je rad s primarnim oblikom DNK, koji je pri visokoj temperaturi, blizu 100 stupnjeva, podijeljen u dva lanca.
  2. Temperatura se smanjuje, niti su spojene na fragmente nukleinske kiseline - temeljni premaz.
  3. Nastaje izduženje - sinteza molekularne strukture.

Cijela se sesija sastoji od tridesetak takvih postupaka, ponavljajući ciklus kao lančanu reakciju. To je potrebno za stvaranje broja stanica u kojima nastale bakterije postaju prepoznatljive.

Zaključak studije

Opis rezultata PCR-a (lančana reakcija polimeraze) daje liječniku tuberkuloze jednostavan ili se koristi. U prvom slučaju, opis će sadržavati samo podatke o prisutnosti ili odsutnosti Kochovih štapića. Ako je dekodiranje detaljno, iz njega možete saznati opseg bolesti, njen fokus. Prema tim kriterijima moguće je odrediti najprikladniji tretman za tuberkulozu u svakom slučaju.

Analiza polimeraze lančane reakcije ne razlikuje žive i mrtve patogene i govori samo o njihovoj prisutnosti. Stoga, ima smisla proći drugi test za tuberkulozu samo 3-4 tjedna nakon prolaska terapije koju je propisao liječnik.

Ako je rezultat pozitivan, na zaključak se stavlja natpis "Mycobacterium tuberculosis". Ako postoji negativan rezultat, uz biološko ime bakterije postoji oznaka "nije otkrivena". Analize mogu biti lažno pozitivne. To se događa rijetko - u slučaju kršenja tehnike izvođenja PCR studija ili u prisutnosti neživih mikroorganizama. Konačni zaključak o bolesti može donijeti samo liječnik.

Prednosti metode

PCR dijagnostika tuberkuloze stekla je popularnost iz više razloga. Ima mnogo prednosti, uključujući:

  1. Točnost istraživanja. Kod analize tehnologije moguće je identificirati bakterije, čak i ako su prisutne u malim količinama.
  2. Brzi rezultat. Cijeli proces od sakupljanja materijala do gotovog zaključka traje oko 5 sati. U usporedbi sa sjetvom, mora čekati nekoliko tjedana.
  3. Potpuna sigurnost za osobu, za razliku od fluorografije s njezinim zračenjem.
  4. Koristi se bilo koji tekući biomaterijal. Za provedbu PCR-a u plućnoj tuberkulozi, sputum daje najtočnije informacije, a kod tuberkuloznog meningitisa uzorak se uzima iz leđne moždine. Test krvi pomaže identificirati lokalna žarišta infekcije.
  5. Testira se osjetljivost bakterija na antibiotike. To vam omogućuje propisivanje ispravnog liječenja.
  6. Rana dijagnoza. Možete saznati o prisutnosti bolesti prije pojave simptoma.

Osim pozitivnih aspekata, postoje i nedostaci. Glavni je cijena. Analiza PCR-a nije jeftina, što je povezano s upotrebom skupe opreme. Drugi nedostatak je potreba čekanja na ponovno testiranje nakon liječenja tuberkuloze. Ponekad je rezultat testa lažno pozitivan. To se događa zbog bakterijske mutacije.

Kada je potrebna PCR

PCR za plućnu tuberkulozu nema kontraindikacija i apsolutno je sigurna. Stoga postoje određene situacije i bolesti kada je to jedina mogućnost istraživanja.

To uključuje:

  • trudnoća;
  • kontakt s tuberkuloznim pacijentom;
  • poteškoće u određivanju dijagnoze plućne bolesti;
  • pregled prije operacije;
  • alergijska reakcija;
  • HIV infekcija;
  • mlade dobi.

Možete koristiti metodu PCR-a u smjeru koji se izdaje u ftiologiji, kao i pedijatar, liječnik ili pulmolog.

Što može zamijeniti PCR dijagnozu tuberkuloze

Ostale vrste anketa nisu zastarjele, ali se i dalje koriste. Koriste se u slučajevima kada nije moguće provesti PCR za tuberkulozu. Osim toga, moderna metoda nije idealna, ponekad se njezini pokazatelji dovode u pitanje i zahtijevaju ponovnu provjeru.

Sljedeće metode pomažu u određivanju prisutnosti tuberkuloze u osobi:

  • tuberkulinska dijagnoza (Mantoux);
  • rendgenski pregled prsnog koša;
  • ispitivanje biološkog materijala za floru;
  • x-zraka pluća.

Ove studije su besplatne i dostupne svima. Ali oni imaju svoje nedostatke:

  • Test tuberkuloze uzrokuje alergije. Kontraindicirano kod kožnih bolesti.
  • Rendgenske studije praćene su zračenjem, što se ne odnosi na djecu, osobe s imunodeficijencijom i trudnice.
  • Bakteriološke analize traju mnogo više vremena, rezultat se može čekati i do mjesec dana.

Alternative nisu jamstvo sto posto točnog zaključka. Najčešće se koriste u preventivne svrhe. Dijagnoza tuberkuloze PCR-om daje najpouzdanije informacije. Ako je moguće, bolje je koristiti ga.

Osobitosti tuberkuloze u djece i potreba za PCR

Dijete treba posebno zaštititi od bolesti - infekcija tuberkulozom može uzrokovati ozbiljnu štetu tijelu s još nedovoljno formiranim imunitetom.

Nakon ulaska Kochova štapića u dječji organizam, razvoj bolesti prolazi kroz sljedeće faze:

  • Latentna. Traje do godinu dana, bez ikakvih simptoma.
  • Opijenosti. Utječe na ukupno zdravlje. Pojavljuje se slabost, apatija, nedostatak apetita, pospanost i smanjena učinkovitost. Stalno blago povišena temperatura.
  • Primarni oblik bolesti. Tuberkuloza je lokalizirana, tvoreći fokus bolesti. Dijete ima kašalj, otežano disanje, glavobolju, otečene limfne čvorove.
  • Tuberkularni bronhoadenitis. Simptomi su bol u lopaticama, kašalj s različitim tonovima zvuka, teško disanje.

Obično se tuberkulin ubrizgava kako bi se identificirala infekcija pod kožom djeteta. Ako je ova vrsta pregleda kontraindicirana, tada je PCR za tuberkulozu nezamjenjiva opcija za dijagnozu. Djeca obično uzimaju krvni test, ali se sputum skuplja ako je potrebno. Pri najmanjoj sumnji na prisutnost tuberkuloze, provode se dodatne studije kako bi se osigurao pozitivan rezultat i odmah započelo liječenje u ranoj fazi, sprječavajući razvoj bolesti.

Suvremene metode istraživanja uvijek su brže i pouzdanije. Šteta je što zbog skupe opreme za takva ispitivanja postoji mogućnost ne u svim medicinskim ustanovama i lokalitetima. Koji način provođenja pregleda obično odabire liječnik, ali pacijent ima pravo izbora. Ako ste morali uzeti PCR test, recite nam o tome u komentarima. Ako je članak koristan za vas, podijelite ga na društvenim mrežama - možda će to pomoći vašim prijateljima.

Što je PCR za tuberkulozu i kako napraviti test?

PCR za tuberkulozu propisuje se kada je nemoguće napraviti dijagnozu ili je nemoguće provesti druge studije. Analiza omogućuje identificiranje Kochovog štapića u najranijim fazama i pravovremeno započinjanje liječenja.

Opis PCR-a za tuberkulozu

Indikacije za PCR dijagnostiku

Vrste PCR-a za tuberkulozu

Priprema za analizu

Kako je PCR za tuberkulozu

Tumačenje rezultata istraživanja

Osobitosti PCR-a za tuberkulozu u djece

Koliko košta PCR za tuberkulozu?

Komentari i recenzije

Opis PCR-a za tuberkulozu

PCR (polimeraza lančana reakcija) za tuberkulozu je točna analiza koja može otkriti Koch štap u nekoliko sati. Dijagnostika se temelji na metodama genetskog inženjeringa. Liječnici izoliraju DNA stanicu pomoću gensko-molekularnih testova kako bi odredili vrstu patogena.

Prednosti metode

  • omogućuje vam da identificirate patogena u ranim fazama, bez manifestacije vidljivih simptoma;
  • dijagnostika nema kontraindikacija i dopuštena je djeci;
  • istraživanja mogu se provesti pri uzimanju minimalne količine materijala.
  • univerzalnost istraživanja biomaterijala;
  • Studija je učinkovita u određivanju recidiva bolesti.

Nedostaci metode

Uz prednosti, PCR studije također imaju nedostatke.

Glavni su:

  1. Studija nije svugdje gdje možete proći. Budući da je oprema za takvu dijagnozu skupa, postavlja se u plaćene laboratorije.
  2. PCR za tuberkulozu može dati pozitivan odgovor ako detektira mrtve mikobakterije, na primjer, nakon liječenja.
  3. Mutacije patogena značajno smanjuju učinkovitost PCR metode, budući da lanci DNA nisu u stanju sekvencijalno sintetizirati.
  4. Potreba za pažljivim odabirom biomaterijala za analizu.

Indikacije za PCR dijagnostiku

Pošaljite upitniku sljedeće indikacije:

  1. Ako postoji barem jedan kontakt s bolesnikom s tuberkulozom i teško je identificirati bolest pomoću standardnih testova.
  2. Postoje situacije u kojima nije moguće dovesti osobu na rendgenske snimke ili druge studije. U takvim je slučajevima mnogo lakše isporučiti ispljuvak.
  3. Analiza se određuje uoči predstojeće operacije, kada je potrebno utvrditi je li osoba bolesna ili ne.
  4. Ako pacijent ima sumnjiv rezultat Mantoux reakcije.
  5. Odredite trudnicama i djeci izbjegavanje izlaganja rendgenskim zrakama.

Vrste PCR-a za tuberkulozu

Izbor biomaterijala za probir za tuberkulozu treba odrediti pojedinačno.

Za dijagnozu PCR za tuberkulozu mogu se uzeti testovi:

Test krvi

Značajke analize krvi za tuberkulozu:

  1. Provodi se u slučajevima kada druga dijagnostika nije prikladna ili kontraindicirana. Na primjer, da biste postavili točnu dijagnozu, trebate uzeti više od jedne rendgenske slike. Prekomjerna izloženost nije sigurna za tijelo, pa je mnogo lakše uzeti krv od pacijenta.
  2. Također, liječnik može dati smjer krvi kada dobiva kontroverzne rezultate nakon fluorografije.

Analiza sline

  1. Analiza sline je manje popularna i informativna nego druge studije, jer tuberkuloza ne utječe na žlijezde slinovnice. Stoga će u većini slučajeva rezultat biti negativan.
  2. Cilj metode je identificirati plućne i ekstrapulmonalne oblike.
  3. Ako se boja uzorka ne mijenja pod djelovanjem reagensa, to znači da nema patogena. Ako se ipak pojavi sumnja na bolest, tada se provodi dodatni kompleks analiza.

Analiza sputuma

Analiza sputuma je najinformativnija za otkrivanje patogena tuberkuloze. Uzorci se uzimaju nekoliko puta, što je u pravilu dovoljno tri puta. Time se eliminira mogućnost grešaka u dobivanju materijala loše kvalitete.

Ako je osoba zaražena tuberkulozom, sputum u malim količinama bit će oslobođen zajedno s kašljem. U bolesnika u uznapredovalom stadiju bolesti sluz će se izlučiti krvavim flasterima.

Ne preporučuje se uzimati ispljuvak za pregled ako bolesnik sumnja na tuberkulozu kostiju ili živčanog sustava.

Analiza urina

Analiza mokraće je jedan od načina otkrivanja vanplućnih oblika bolesti: tuberkuloze bubrega i mokraćnog sustava.

U slučaju plućnog oblika bolesti, opća analiza urina je praktički neinformativna, budući da nisu uočene naglašene patološke promjene.

Iz videa ćete saznati koji liječnik postavlja dijagnozu tuberkuloze. Snimljeno kanalom tuberculum. ru.

Priprema za analizu

Prilikom uzimanja krvnog testa PCR treba slijediti neka pravila kako bi se dobio pouzdan rezultat:

  • Preporučuje se analiza na prazan želudac;
  • treba isključiti alkohol uoči istraživanja;
  • morate uzimati antibiotike 15 do 20 dana prije analize;
  • Preporučljivo je suzdržati se od pušenja jedan sat prije prikupljanja krvi.

Prilikom uzimanja sputuma za pregled također se preporučuje da se pridržavate nekih pravila:

  • materijal se skuplja u jutarnjim satima, dakle pre-četkanje zuba i temeljito ispiranje usne šupljine;
  • ako se sputum ne pomiče dobro, preporučuje se uzimanje ekspektoransa navečer ili udisanje;
  • Potrebno je prestati uzimati antibiotike 15 dana prije pregleda.

Za dobivanje pouzdanih rezultata analize urina, pacijentu se preporučuje pridržavanje sljedećih pravila:

  • materijal mora biti prikupljen ujutro;
  • navečer se ne preporuča jesti hranu koja može promijeniti boju tekućine (cikla, borovnica i drugo);
  • Prestanite uzimati antibiotike 15 dana prije pregleda.

Kako je PCR za tuberkulozu

Značajke unosa materijala:

  1. U bolesnika se ujutro iz vene u laboratoriju uzima krvna pretraga.
  2. Za isporuku sputuma na sluz, nužno je nužno iz grkljana, a po mogućnosti bez velike količine sline. Njezin pacijent mora pljunuti u posebnu sterilnu posudu, a zatim je predati studiji.
  3. Liječnici uzmu poseban alat iz sluznice obraza.
  4. Urin se iznajmljuje u posebnom spremniku. Uzmite srednji dio jutarnjeg porcije.

Molekularno-genetička reakcija PCR-om provodi se pomoću posebnog uređaja nazvanog amplifikator. Proučavanje potrebnih segmenata DNA, koji započinje sintezu molekula.

Tehnika se sastoji od četiri faze:

  1. U početku se traženi biomaterijal prikuplja za istraživanje (krv, ispljuvak i slina).
  2. Zatim se uzorak zagrijava na temperaturi do 98 stupnjeva i ne više od dvije minute. Tako se uništava primarni oblik genetike DNA i formiraju se dva lanca.
  3. Slijedi žarenje ili snižavanje temperature, zbog čega se prajmer veže za lanac DNA.
  4. Posljednja faza naziva se izduženje. To je sinteza molekula, što dovodi do konačnog rezultata.

Morate provesti 25-30 takvih ciklusa da biste dobili određeni broj kopija DNA virusa. Uzročnici bolesti određuju ih.

Sadržaj informacija i pouzdanost PCR dijagnostike je 100%.

Tumačenje rezultata istraživanja

Vrijeme proizvodnje analize je oko 5-6 sati.

Dijagnostika PCR metodom daje 2 varijante rezultata:

  1. Pronađeno. U materijalu koji je istraživan, detektirana je DNA tuberkuloznog agensa. Vjerojatnost zaraze je 97%. Takvi se pacijenti brzo šalju u ambulantu za TB, gdje će se liječiti.
  2. Nije otkriveno. Negativan odgovor ukazuje na odsutnost uzročnika.

Ako je rezultat pozitivan, liječnik izvodi detaljno dekodiranje, koje određuje fazu i fokus bolesti.

Galerija fotografija

Osobitosti PCR-a za tuberkulozu u djece

PCR se propisuje ako je rezultat Mantoux testa neizvjestan ili kod najmanje sumnje na infekciju. Pružanje postupka je sigurno za djecu.

PCR dijagnoza tuberkuloze u djece i odraslih: indikacije za

Svjetska zdravstvena organizacija prije 20 godina priznala je da je stopa širenja tuberkuloze izvan kontrole i dosegla razmjere epidemije. Od tada se situacija nije poboljšala. Svake se godine dijagnosticira više od milijun slučajeva bolesti, od kojih je gotovo četvrtina fatalna. U posljednjem desetljeću, stopa incidencije među djecom se povećala, većina oblika bolesti nije pogodna za standardnu ​​antibiotsku terapiju.

Danas je jedan od globalnih zadataka u medicini razvoj takvih dijagnostičkih metoda koje će omogućiti identifikaciju patologije prije početka izraženih kliničkih simptoma. Jedna od njih je lančana reakcija polimeraze (PCR) za tuberkulozu, koja pomaže u otkrivanju štapića koji uzrokuju kohove bolesti u krvi, sputumu i drugim biološkim tekućinama.

Dijagnoza tuberkuloze

Probirni testovi usmjereni su na otkrivanje bolesnika, nositelja tuberkuloze i sprječavanje širenja infekcije u društvu. Za djecu mlađu od 14 godina koristi se Mantoux test. To je imunološki test u kojem se subkutano ubrizgava doza tuberkulina - složena mješavina genetskog materijala nekoliko tipova mikobakterija. Pojava naglašene reakcije ukazuje na aktivno pojavljivanje infektivnog procesa.

Za preventivni pregled kod odraslih osoba koje koriste fluorografiju ili x-zrake. Ove metode pomažu vizualizirati patološke lezije u plućnom tkivu. Međutim, to uzrokuje poteškoće u razlikovanju tuberkuloze od druge organske patologije (maligne i benigne neoplazme, upalni procesi, parazitske invazije, profesionalno oštećenje pluća).

Kako bi se pojasnila struktura i veličina patološkog fokusa, mogu biti potrebne dodatne instrumentalne studije:

  • ciljana radiografija;
  • računalna tomografija;
  • magnetska rezonancija.

Metode dijagnostike tuberkuloze

U slučaju sumnjivih rezultata i za određivanje adekvatne terapije, postoji potreba za točnijim dijagnostičkim metodama koje omogućuju izolaciju patogena. Mikroskopsko i bakteriološko ispitivanje sputuma koristi se za dugotrajno potvrđivanje plućnih oblika tuberkuloze.

Posljednjih godina učestalost mikobakterija različitih organa i sustava - bubrega, kostiju, crijeva, kože - postajala je učestalija. Za identifikaciju ovih oblika tuberkuloze mogu se koristiti ultrazvuk, urin i feces, te endoskopska ispitivanja.

PCR dijagnostika tuberkuloze pomoći će potvrditi prisutnost Koch štapića u krvi, kao i njegovu osjetljivost na određene lijekove. To je visoko učinkovita metoda koja se temelji na detekciji bakterijskog genetskog materijala u različitim biološkim tekućinama.

Specifičnost i indikacije

Lančana reakcija polimeraze vrlo je osjetljiva mikrobiološka dijagnostička metoda koja se temelji na načelima genetskog inženjeringa. Da bi se potvrdila prisutnost patogena u biološkom materijalu, dovoljno je detektirati jedinstveni fragment nukleinske kiseline za njega. PCR za tuberkulozu može otkriti bakterije u krvi, sputumu, urinu.

Trenutno je razvijeno nekoliko metoda analize. Najpopularnije među njima su sljedeće:

  • PCR u stvarnom vremenu;
  • mikrofluidna tehnologija;
  • sekvenciranje i piro sekvenciranje.

PCR u stvarnom vremenu

Laboratoriji najčešće koriste lančanu reakciju polimeraze u stvarnom vremenu, jer smanjuje broj lažno pozitivnih rezultata, a sam proces analize traje kratko.

S obzirom na veliki broj skrivenih oblika bolesti i neučinkovitost standardnih dijagnostičkih metoda, PCR se sve više koristi. Svrha ove analize prikazana je na:

  • identificiranje sumnjivih područja na X-zrakama;
  • sumnjivi rezultati tuberkulinskog testa;
  • nemogućnost provođenja mikroskopske i bakteriološke analize sputuma kod osoba u teškom stanju;
  • provođenje kirurških intervencija kada je potrebno brzo osigurati da nema infekcije;
  • nedopustivost upotrebe fluorografije, rendgenskih snimaka ili kompjutorske tomografije (na primjer, u trudnica i dojenja, u slučaju prekomjerne izloženosti zračenju);
  • sumnja na ekstrapulmonarnu tuberkulozu (preporuča se koristiti ne samo krv, već i sluz).

PCR dijagnostika tuberkuloze dokazala se u ispitivanju djece zbog nedostatka dodatnog izlaganja i brzih rezultata.

Postupak pripreme i analize

Nije potrebna posebna priprema za PCR za krv. Međutim, kako bi se izbjegle komplikacije uzimanja uzoraka krvi i kako bi se dobio visokokvalitetni materijal, treba slijediti sljedeća opća pravila:

  • analizu treba poduzeti ujutro ne ranije od 2 sata nakon buđenja;
  • Trebalo bi ograničiti unos masne i pržene hrane dan prije uzimanja krvi;
  • suzdržite se od jela, čaja i kave 8-9 sati, dopušteno je piti čistu vodu;
  • Ne pušite najmanje 3-4 sata.

U slučaju trajnih lijekova (hormoni, antikoagulanti, protuupalni lijekovi, antibiotici, razrjeđivači krvi), trebali biste o tome obavijestiti laboratorijskog pomoćnika.

Nakon isporuke ispljuvka dobro treba dobro oprati zube i isprati usta nekoliko puta. Sakupiti materijal u sterilnom spremniku. Za bolje rezultate, navečer se može uzeti ekspektorans ili mukolitik.

Sama dijagnoza sastoji se od nekoliko faza.

    Materijal ograde. Može se izvoditi u laboratoriju i na daljinu. Neke vrste materijala koje pacijent prikuplja samostalno (urin, sluz).

Uništavanje strukture nukleinskih kiselina (denaturacija molekula DNA i RNA). Za to se ispitni materijal zagrijava na temperaturu od 98 stupnjeva i drži nekoliko minuta. Kao rezultat toga, dvostruka spirala se odvija, nastaju jednolančane molekule.

  • Šala. Nakon dodavanja prajmera (kratki dio nukleinske kiseline), temperatura se smanjuje za nekoliko stupnjeva, aktivira se polimeraza.
  • Elognatsiya. Temperatura je dovedena do optimalne razine, aktivnost enzima dostiže maksimum, a drugi lanac je završen u skladu s Chargaffovim pravilom komplementarnosti.
  • Za dovršenje studije potrebno je sintetizirati potreban broj molekula DNA - oko 50 ciklusa gornje reakcije. Potrebno je oko 2-3 sata. Pozitivan rezultat reakcije ne ukazuje uvijek na aktivnu fazu bolesti, već je pokazatelj prisutnosti mikroorganizma u tijelu.

    Prednosti i nedostaci metode

    U usporedbi s drugim mikrobiološkim metodama, PCR ne uzima dugo vremena za otkrivanje Mycobacterium tuberculosis uz pomoć PCR-a, rezultat se može dobiti na dan testiranja.

    Još jedna prednost je visoka specifičnost analize koja omogućuje otkrivanje prisutnosti patogena s točnošću od 90-95% u gotovo svim biomaterijalima (krv, urin, feces, cerebrospinalna tekućina, sputum, crvenilo bronha).

    Međutim, postoji nekoliko nedostataka metode:

    • prilično visok postotak lažno pozitivnih rezultata (do 15%), što je povezano s otkrivanjem neživih mikroorganizama;
    • u nekim slučajevima možete preskočiti činjenicu bolesti, budući da je Mycobacterium tuberculosis često podvrgnut mutacijama i promjenama genetskog materijala;
    • niska učinkovitost u ispitivanju osoba s imunodeficijencijom;
    • visoki troškovi istraživanja, potreba za skupom opremom i reagensima.

    Što se može zamijeniti?

    S obzirom na raznolikost oblika tuberkulozne infekcije, za točniju dijagnozu i izbor liječenja potrebno je kombinirati nekoliko dijagnostičkih studija:

      Obvezna analiza za djecu je Mantoux test. Ako se unošenjem tuberkulina (genetskog materijala mikobakterija) javi izražena reakcija, može se pretpostaviti infekcija bakterijom tuberkuloze.

    Metode X-zraka mogu se koristiti za vizualizaciju patološkog fokusa. U dijagnostici ekstrapulmonalne tuberkuloze koriste se endoskopske metode uz istodobnu biopsiju:

    • bronhoskopija pomaže identificirati lezije grkljana, dušnika, bronha;
    • kolonoskopija - crijeva;
    • cistouretroskopija - organi mokraćnog sustava;
    • histeroskopija - ženske genitalije. Ove metode nisu specifične, za preciznu dijagnozu, patogen treba identificirati.

    Opći klinički testovi pomoći će specifičnije odrediti stanje tijela. Potrebna je potpuna krvna slika s formulom leukocita.

    Povećanje broja neutrofila s smanjenom razinom limfocita i povećanjem brzine taloženja eritrocita (ESR) ukazuje na aktivni upalni proces bakterijske etiologije. Isključiti oštećenje organa mokraćnog sustava općom analizom urina i kulturom sterilnosti.

    PCR je trenutno dostupan u većini privatnih laboratorija. To zahtijeva ne samo visoko kvalificiranih stručnjaka, ali i skupe opreme, veliki broj reagensa. Stoga je uporaba ove metode ograničena unatoč visokoj točnosti i specifičnosti.

    Lančana reakcija polimeraze (PCR) za tuberkulozu

    Tuberkuloza je jedna od najopasnijih bolesti od koje čovječanstvo pati stotinama godina. Iako su znanstvenici bili u stanju identificirati uzročnika i izmisliti antibiotike kako bi ga eliminirali, liječenje nije uvijek uspješno. Glavni razlog je dugo razdoblje latentnog ili latentnog oblika bolesti, koje može trajati nekoliko godina. Kasna dijagnoza značajno smanjuje pacijentove šanse za oporavak i puni život.

    Što je PCR?

    Za otkrivanje mikobakterije tuberkuloze u tijelu više od stotinu godina uspješno je korišten Mantoux test. Ostale metode su se dobro dokazale: bakteriološka kultura u umjetnom mediju, mikroskopija razmaza, ELISA. Međutim, veliki broj komplikacija i lažno pozitivnih rezultata, kao i trajanje nekih metoda, zahtijevali su uvođenje novih tehnologija u dijagnostičku metodologiju. Veliki napredak u području mikrobiologije bio je nastanak PCR analize za tuberkulozu. Već nekoliko desetljeća pokazuje svoju učinkovitost i naširoko se koristi za diferencijalnu dijagnozu različitih oblika tuberkuloze.

    PCR analiza za tuberkuloznu ili polimeraznu lančanu reakciju je metoda detekcije DNA bakterija ili njihovih fragmenata, koja se temelji na povećanju molekula nukleinskih kiselina pod djelovanjem enzimske DNA polimeraze. Za pozitivan rezultat dovoljna je samo jedna molekula patogene DNA, pa se ova metoda smatra vrlo osjetljivom. Dijagnoza OCP u tuberkulozi učinkovitija je od sjetve mikobakterija u umjetnom okruženju, jer, za razliku od kulture, omogućuje razlikovanje divljih i cjepnih sojeva cijepljenih s BCG. Time se izbjegavaju lažno pozitivni rezultati i dijagnoza postaje točnija.

    Prednosti PCR-a

    PCR dijagnostika tuberkuloze omogućuje otkrivanje Kochovog bacila u bilo kojem biološkom okruženju organizma uz određivanje njihovog kvantitativnog sastava čak iu početnom stadiju bolesti, kada su mikobakterije u stanju hibernacije. Dijagnoza bolesti u latentnoj fazi omogućuje da se na vrijeme započne profilaktički tretman, da se spriječi razvoj žarišta upale u plućima i pojave komplikacija u drugim organima i sustavima. Osim toga, PCR test za tuberkulozu ima nekoliko prednosti:

    • visoka specifičnost - 90-100%;
    • visoka brzina - od 4 sata do 2 dana;
    • visoka osjetljivost, osobito kod imunodeficijencije;
    • diferencijalna dijagnoza.

    Glavna prednost metode je u tome što dijagnoza CRC tuberkuloze u djece omogućuje razlikovanje diseminiranog oblika bolesti od ograničenog žarišta, čak i kod negativnih rezultata drugih testova. Diferencijalno testiranje omogućuje vam da odaberete pravi režim liječenja i povećate učinkovitost terapije.

    Visoka specifičnost analize postiže se uklanjanjem unakrsnih reakcija s drugim molekulama nukleinskih kiselina, a visoka osjetljivost omogućuje otkrivanje mikobakterija čak iu malom volumenu prikupljenog materijala. PCR metoda sputuma za tuberkulozu ima najveću pouzdanost, njezina specifičnost doseže 100% u usporedbi s istraživanjem drugih bioloških materijala.

    Poseban mehanizam PCR-a pruža široke mogućnosti za otkrivanje Koch-ovih štapića kod imunokompromitiranih pacijenata. Prema metodi analize, reakcija detektira antigene, tako da nije važno ako tijelo proizvodi antitijela na patogen, ili ne. Stoga je moguće dijagnosticirati ekstrapulmonalne oblike bolesti i uznapredovale slučajeve u bolesnika s netočnostima u imunološkom sustavu, što nije moguće drugim metodama.

    Nedostaci metode

    Unatoč brojnim prednostima i visokoj osjetljivosti testa, PCR za tuberkulozu može dati lažno negativan rezultat. Budući da se uzima vrlo mala količina biomaterijala za dijagnozu, činjenica da se patogen "skriva" u stanici ili upalni fokus nije isključena i ne oslobađa se izvan.

    Osjetljivost ove metode kod djece je 25-80%. Na primjer, u randomiziranoj studiji u skupini bolesnika s klinički dokazanom dijagnozom, PCR test krvi na tuberkulozu dao je pozitivan rezultat samo u 50% bolesnika. S tim u vezi, prilikom testiranja djeteta na patogene mikobakterije nije moguće zamijeniti jednu dijagnostičku metodu drugom. Kako bi se u potpunosti provjerila odsutnost infekcije, potrebno je provesti sveobuhvatnu studiju na više načina odjednom.

    Postupak prikupljanja

    Glavni uvjet za pouzdanost PCR dijagnostike je usklađenost s pravilima za prikupljanje bioloških tekućina za analizu. Kontaminirani ili nepravilno prikupljeni materijal može uzrokovati netočne rezultate. Najčešći su analiza sputuma, krvi i urina, ali za dublju diferencijalnu dijagnozu možete uzeti uzorke iz sadržaja želuca, sinovijalne tekućine, cerebrospinalne tekućine, tekućine za ispiranje bronha, sperme, izlučivanja prostate.

    PCR u urinu za tuberkulozu uzima se ujutro nakon vanjske genitalne higijene mokrenjem u sterilni spremnik. Tijekom postupka važno je ne dirati unutarnje stijenke spremnika kako bi se spriječio ulazak mikroorganizama treće strane. Žene koje žive normalan seksualni život svakako bi trebale staviti tampon u vaginu kako bi se izbjeglo otpuštanje treće strane.

    Krvni test se uzima ujutro na prazan želudac, a PCR sputuma za tuberkulozu može se obaviti u bilo koje doba dana uz obveznu prethodnu oralnu higijenu. To je potrebno za uklanjanje ostataka hrane koji mogu ući u spremnik. Prilikom iskašljavanja sputuma, važno je spriječiti ulazak sline i sluzi iz nazofarinksa u spremnik, što može iskriviti podatke analize.

    Proučavanje sadržaja želuca provodi se u bolnici rano ujutro, dok je sputum progutan preko noći u želucu. Kako bi se otkrila mikobakterija tuberkuloza, ova metoda čini trostruko zasijavanje, što najvjerojatnije omogućuje izoliranje Kochovog bacila.

    Rezultati dekodiranja

    Kvalitativna analiza PCR-a daje 2 vrste rezultata "otkrivenih" ili "neotkrivenih". Oni označavaju pozitivnu i negativnu presudu. Odgovor "otkriven" znači da je DNK infektivnog agensa prisutna u uzorku za testiranje, a sa 97% vjerojatnosti da je tijelo zaraženo tuberkulozom. Negativan rezultat ukazuje na odsutnost Kochove palice u uzorku biološkog materijala i 97% šanse da tijelo nema velik broj mikobakterija, a 60% da osoba nije zaražena.

    Najveća specifičnost za dijagnozu tuberkuloze je krvni test i sputum. Uz pozitivan rezultat ukazuju na infekciju organizma, što zahtijeva hitne terapijske mjere. Studije drugih biomaterijala ne ukazuju na tijek bolesti, već samo na prisutnost stranih bakterija. To se događa kada je osoba nositelj bolesti, ali ne širi zarazu u okoliš i ne inficira zdrave ljude.

    Kvantitativna PCR analiza se provodi rjeđe, a liječnik se bavi dekodiranjem njegovih rezultata. Pokazatelji istraživanja koriste se za određivanje aktivnosti bolesti i stupnja oštećenja organizma. Na temelju dobivenih podataka, stručnjak može odrediti učinkovitost liječenja i, ako je potrebno, prilagoditi terapijsku shemu.

    Tuberkuloza je uvijek bila i ostaje jedan od najozbiljnijih problema za zdravlje cijelog čovječanstva. Moderne dijagnostičke metode mogu otkriti bolest u ranoj fazi kako bi se liječenje započelo na vrijeme. Tuberkulinski test, mikroskopija razmaza, kultura bakterija na umjetnim hranjivim medijima dokazali su se u području laboratorijske dijagnostike tuberkuloze. Međutim, dugo čekanje na rezultate i povećana učestalost lažno pozitivnih očitanja učinili su ih zastarjelim i doveli do izražaja naprednije tehnologije. PCR analiza je vrlo specifična i visoko učinkovita metoda za dijagnosticiranje tuberkuloze. Njegovi rezultati su najpouzdaniji među svim predloženim laboratorijskim metodama za otkrivanje Kochovih štapića. To omogućuje ne samo donošenje konačne presude, nego i provođenje potrebne diferencijalne dijagnoze.

    Lančana reakcija polimeraze za tuberkulozu

    PCR analiza za tuberkulozu omogućuje vam da identificirate bolest u bilo kojem stadiju razvoja s minimalnim brojem mikobakterija ili čak ako postoje fragmenti u ljudskom tijelu pomoću patogene DNA.

    Što je PCR?

    PCR se pojavio relativno nedavno. Godine 1983. tu je metodu izradio američki mikrobiolog Carey Mullis, za koji je dobio Nobelovu nagradu. Osnova PCR-a je ponovljeno udvostručenje određene regije DNA uz pomoć enzima in vitro. Kao posljedica toga, DNA patogena je u modi vizualizirati čak iu svojoj prisutnosti u minimalnim količinama (tragovi prisutnosti). To je zlatni standard specifičnosti.

    Tuberkuloza PCR (proces lanca polimera) je dijagnostički postupak za otkrivanje infekcije genetskim inženjeringom. Ova metoda istraživanja koristi se u mikrobiološkim, virološkim i imunološkim medicinskim laboratorijima u sumnjivim i praktički bezizglednim dijagnostičkim slučajevima.

    Što je potrebno za analizu?

    Analiza zahtijeva 3 komponente:

    • DNA uzorak.
    • Nukleotidni spojevi.
    • Enzim polimeraze.

    Analiza se podnosi u laboratorij kako je propisao liječnik.

    Što je osnova metode?

    Na početku istraživanja iz biofluida se ekstrahira segment mikrobne DNA.

    PCR određuje vrstu patogena, 2-3 sata nakon testa. Međutim, ne mora se izolirati iz biološkog materijala ili dugotrajno rasti u laboratoriju. Glavno je da uzorak sadrži komad zaražene DNA. Tijekom analize tuberkuloze nastaje umjetna sinteza infekcije ribonukleinske kiseline in vitro. Zbog brze reakcije nakon nekoliko sati, možete dobiti pouzdan rezultat.

    Faze dijagnoze

    Tuberkuloza PCR je jednostavna dijagnostička metoda koja vam omogućuje da dobijete odgovor u kratkom vremenu. Da bi se odredila razlika u cenzusu, uzima se biološki materijal zaražene osobe (krv, sputum, biološka tekućina).

    Dijagnoza se odvija u tri glavne faze:

    • Nakon uzorkovanja u laboratoriju, uništava se primarni oblik DNA. Na temperaturi od 980 stupnjeva, 1,5 lanci se odvoje za 1,5 minuta.
    • U sljedećoj fazi, vrši se žarenje, temperatura zraka se smanjuje za nekoliko dijelova, DNA je povezana s početnicom.
    • Posljednja faza istraživanja naziva se izduženje. To je biosinteza molekula.

    Da bi se identificirala željena DNA s česticom infekcije, dijagnostika se može izvesti 20-25 puta.

    Je li potrebno napraviti PCR za tuberkulozu?

    PCR analiza za tuberkulozu se uvijek radi kada postoji potreba za tim, ona je uključena u standard kvalitete ispitivanja pacijenta za tuberkulozu. Da biste ga proveli, trebate samo uputnicu od svog liječnika. Najčešće se u poliklinikama koriste druge dijagnostičke metode za određivanje tuberkuloze.

    To uključuje:

    • Ispitivanje i prikupljanje anamneze.
    • Liječnički pregled.
    • Mantoux tuberkulinski test.
    • Rendgenska ili fluorografija.
    • SAD.
    • Mikroskopska dijagnoza uzorka sputuma.

    Unatoč velikom broju dijagnostičkih alata, broj zaraženih svake godine raste. Osim toga, patologija je stekla neke značajke: ozbiljnost procesa, povećanje smrtnih ishoda i imunitet patogena na lijekove.

    Liječnici ne preporučuju napuštanje godišnjeg pregleda i cijepljenja, jer to povećava rizik od zaraze. PCR analiza ima mnoge prednosti, pa se smatra najpreciznijom i najinformatičnijom od svih instrumentalnih metoda za detekciju tbc i naširoko se koristi u modernim klinikama.

    Koja je vrijednost metode?

    Proces lanca polimera se često koristi zajedno s dodatnim metodama za otkrivanje infekcije tuberkulozom. Vrijednost metode je sljedeća:

    • Kratko vrijeme zadržavanja. Već nakon 2-3 sata nakon davanja krvi moguće je detektirati prisutnost infekcije u biološkom materijalu. To je neophodno u slučajevima kada postoji pitanje života i smrti, i morate identificirati točnu dijagnozu za kiruršku intervenciju.
    • Neke dijagnostičke metode imaju vlastite kontraindikacije i ne pokazuju uvijek potpunu sliku dijagnoze. Uz pomoć PCR-a, patogen se odmah otkriva i moguće je provesti postupak za osobe svih uzrasta.
    • Kao uzorak možete uzeti bilo koji zaraženi biološki materijal. Za određivanje plućnih oblika bolesti uzima se urin ili slina. Uzorak krvi pomaže identificirati sve oblike patologije. Spinalna tekućina potrebna je za određivanje tuberkuloznog meningitisa.
    • Sigurnosna metoda. Za istraživanje je potreban samo biološki materijal pacijenta. Dakle, to je potpuno siguran i bezopasan postupak za djecu i odrasle, za razliku od fluorografije, koja se radi od 18. godine, i Mantouxa, što uzrokuje negativne reakcije u tijelu.
    • Vrlo osjetljiv test. To omogućuje da se identificira patologija čak iu ranim fazama razvoja, kada virus još nije pogodio sve stanice u tijelu.
    • Učinkovita metoda za dijagnosticiranje recidiva patologije.
    • Inovativan način za identifikaciju Koch štapa od prvih dana njegova razvoja. To vam omogućuje da brzo započnete ispravno liječenje i spasite osobu od smrti. U ranim fazama razvoja patologija se može potpuno izliječiti bez komplikacija.

    Ova metoda dijagnoze ima mnoge prednosti i aktivno se koristi u raznim medicinskim ustanovama. Međutim, unatoč prednostima, PCR ima i svoje negativne osobine.

    Koji su nedostaci?

    Nedostaci procesa lanca polimera uključuju:

    • Visoki troškovi postupka.
    • Metoda nije prikladna za one koji su već podvrgnuti liječenju, jer mrtve infektivne stanice mogu dati lažno pozitivan rezultat.
    • Kada mutacija stanica DNA može biti lažni rezultat.
    • Stručnjak mora ispravno uzeti potreban biološki materijal kako bi odredio vrstu infekcije i mjesto njezine lokalizacije.
    • Nije uvijek dopušteno za bolesnike s plućnom bolešću.

    Tko pokazuje analizu?

    Najčešće se takva analiza dodjeljuje:

      • Ako su rezultati Mantoux-a dali sumnjive podatke, krv se uzima iz vene zbog tuberkuloze.
      • Pacijent je imao kontakt sa zaraženom osobom, ali liječnički pregled nije pomogao u određivanju ispravne dijagnoze.
    • Tijekom hitne operacije, u kojoj morate u najkraćem roku znati je li pacijent zaražen.
    • Tijekom trudnoće, kada druge dijagnostičke metode ne mogu dati točan rezultat bez štete za fetus.

    Nakon ispitivanja svih prednosti i nedostataka dijagnosticiranja tbc, možemo zaključiti da je najbolje koristiti nekoliko dijagnostičkih metoda odjednom za preciznu dijagnozu. To će pomoći osigurati da postoji infekcija u tijelu i na kojem stupnju napredovanja. Nakon što je ispravno definirana dijagnoza, moguće je započeti brzo konzervativno liječenje i spasiti osobu od smrti.

    PCR dijagnoza tuberkuloze

    Tuberkuloza je specifična infekcija, njen fokus može biti u ljudskim tkivima godinama, a zatim se širiti nekoliko mjeseci. To je kronična bolest čiji je optimalni režim liječenja teško odabrati. Jedan od razloga za to je i kasna dijagnoza, kada su se mikobakterije, dok su u ljudskom tijelu, već prilagodile mnogim lijekovima.

    Koje suvremene metode dijagnoze postoje? PCR dijagnostika - što je to? Kako se ovo istraživanje radi? U kojim slučajevima je tuberkuloza dijagnosticirana ovom metodom i koja je njezina bit?

    Što je PCR dijagnostika

    To je jedna od najmodernijih metoda dijagnosticiranja ne samo bolesti, već i otkrivanja biološkog materijala. PCR dijagnostika je izumljena relativno nedavno. Prije otprilike 30 godina, 1983. godine, američki biokemičar, Carey Banks Mullis, predložio je kompleksnu shemu oporavka biološkog materijala mikroorganizama u jednom kratkom segmentu. Zahvaljujući otkriću, znanstvenik je nagrađen najvišom nagradom - Nobelovu nagradu.

    Što je to - PCR dijagnostika infekcija? Lančana reakcija polimeraze (PCR) je dijagnoza otkrivanja virusnih bolesti, koja se temelji na metodama genetskog inženjeringa. Široko se primjenjuje u medicinskoj mikrobiologiji, imunologiji i virologiji. Metoda je univerzalna i pomaže u postavljanju dijagnoze s malom količinom materijala. Infekcija se može otkriti doslovno u prvim satima infekcije, mnogo prije pojave prvih simptoma bolesti.

    Metoda se sastoji od dobivanja iz materijala bolesne osobe ne samog patogena, već fragmenata genoma (čestica DNA), njegove biosinteze s naknadnim utvrđivanjem kojoj klasi mikroorganizama pripada dobiveni genetski materijal pomoću molekularno genetskih metoda.

    Unatoč činjenici da je riječ o složenom procesu, potrebno je mnogo manje vremena nego mnogi biološki načini otkrivanja infektivnih agenasa. Unutar samo nekoliko sati, mikroorganizam se može detektirati PCR-om. Da bi se to postiglo, nema potrebe da se izolira iz okoline (krv, cerebrospinalna tekućina, sputum) i dugo se uzgaja na umjetnim hranjivim medijima. Dovoljno je da mali dio DNA lanca infektivnog agensa bude prisutan u ispitivanom materijalu.

    Osnova reakcije je mogućnost u umjetnim uvjetima (in vitro) da stvori sintezu molekula nukleinske kiseline infektivnog agensa.

    Što je potrebno za PCR?

    1. Prajmeri su segmenti DNA iz kojih počinje biosinteza ili stvaranje.
    2. Nukleotidi ili kompleksni spojevi koji čine bazu DNA ili RNA molekule.
    3. Lančana reakcija polimeraze je nemoguća bez prisutnosti polimeraze, koja je enzim koji ubrzava PCR.

    Faze PCR dijagnostike

    Kako se molekularna dijagnostika provodi pomoću PCR-a? Postupak je jednostavan i kratko traje, uzimajući u obzir prikupljanje materijala.

    1. Prije početka istraživanja uzimaju potreban biološki materijal - to je voda za pranje bronha, krv, sadržaj želuca, ispljuvak. Vrsta biološkog materijala ovisi o sumnjivom patogenu.
    2. Denaturacija ili uništenje primarne strukture DNA koja se sastoji od dva lanca. Suština ove faze je razdvajanje dva kruga pod utjecajem visoke temperature (maksimum je 98 ºC, koji traje ne više od dvije minute).
    3. U sljedećoj fazi PCR-a, zvana žarenje, temperatura se smanjuje za nekoliko stupnjeva tako da se prajmer veže za lanac DNA.
    4. Izduženje, tijekom kojeg se sinteza željenih molekula odvija izravno.

    Kao rezultat, samo 25-30 takvih ciklusa dobiva potreban broj kopija DNA mikroorganizama, koje je lako prepoznati.

    Da li PCR zahtijeva dijagnozu tuberkuloze?

    Nije moguće da apsolutno sve osobe sa sumnjom na tuberkulozu izvedu PCR, jer metoda zahtijeva skupu opremu. Nisu sve javne klinike u mogućnosti kupiti. Osim toga, dogodilo se da se uobičajene metode dijagnosticiranja infekcije u većini slučajeva i opravdavaju.

    To uključuje:

    • istraživanje pacijenta, uzimanje povijesti;
    • potpuni pregled osobe;
    • istraživanje pomoću Mantoux tuberculin testa;
    • radiografija ili fluorografija;
    • računalna dijagnostika, ako je potrebno;
    • mikrobiološke metode istraživanja: mikroskopija razmaza i bakteriološko ispitivanje sputuma.

    PCR za tuberkulozu provodi se u posebnim slučajevima kada je teško postaviti dijagnozu ili nije moguće provesti druge instrumentalne metode.

    Usprkos obilju dijagnostičkih metoda, incidencija tuberkuloze i dalje raste. Trenutno ne postoji samo njegov rast, nego i druge značajke:

    • bolest se često javlja u teškom obliku;
    • povećava se broj smrtnih slučajeva;
    • sve otporniji na modernu kemoterapiju dijagnosticiraju se oblici bolesti.

    Nevoljkost ljudi da se godišnje podvrgavaju rutinskim liječničkim pregledima, odbacivanje cijepljenja dovodi do širenja tuberkuloze. U takvim uvjetima potrebne su brze, informativne i učinkovite metode istraživanja koje trebaju biti dostupne djeci i odraslima. Sve gore navedene dijagnostičke metode mnogo su slabije od PCR-a.

    Prednosti dijagnosticiranja tuberkuloze uz PCR

    Ovo istraživanje, iako novo, pokazalo se dobro, pogotovo u kontroverznim slučajevima u kojima je nemoguće postaviti dijagnozu iz više razloga.

    Zahvaljujući PCR-u mnogo je lakše detektirati uzročnika tuberkuloze u ispitivanom materijalu.

    Prednosti PCR dijagnostike su sljedeće.

    1. Ovo je brza analiza. Mali fragment molekule DNA može se koristiti za dijagnosticiranje u samo nekoliko sati (oko pet), koji se uspješno koristi u izvanrednim situacijama kada je, primjerice, prije operacije potrebno utvrditi je li osoba bolesna od tuberkuloze.
    2. PCR analiza je dopuštena u slučaju kada druge metode nisu dostupne ili zabranjene (za otkrivanje plućne tuberkuloze, ponekad morate uzeti nekoliko radiografskih snimaka, što će biti velika doza zračenja).
    3. Uz pomoć PCR-a ispituje se bilo koje biološko okruženje na prisutnost patogena u njemu. Na primjer, možete provesti istraživanje cerebrospinalne tekućine, ako postoji sumnja na tuberkulozni meningitis.
    4. Dozvoljena je PCR dijagnoza infektivnih bolesti u djece, jer je metoda sigurna.
    5. Omogućuje identifikaciju patogena u bilo kojoj fazi bolesti.
    6. Visoka osjetljivost PCR-a omogućuje otkrivanje Mycobacterium tuberculosis, čak i ako u biološkom materijalu postoji samo nekoliko mikroorganizama.
    7. Dobro je izvršiti dijagnozu recidiva bolesti.

    Nakon svega čitanje PCR-a čini se gotovo savršenom dijagnostičkom metodom, koja bi svakoga trebala učiniti sumnjivom na tuberkulozu. No, tu su i nedostaci, oni se moraju uzeti u obzir.

    Nedostaci PCR u dijagnostici tuberkuloze

    U naše vrijeme takva je dijagnostika rjeđa od pravilnosti. I za to postoji razlog.

    1. To je skupa metoda istraživanja. U mnogim klinikama oprema za PCR nije prisutna zbog visokih troškova, ali se analiza još uvijek može obaviti u plaćenim laboratorijima.
    2. Odmah nakon liječenja, mrtve mikobakterije ili živi u malim količinama mogu još uvijek biti prisutni u ljudskom tijelu (rezultat će biti pozitivan tijekom PCR dijagnostike), pa će metoda u ovom trenutku biti nepouzdana, nema smisla provoditi je.
    3. Mutacije mikobakterija rezultiraju neučinkovitim PCR-om - normalna sekvenca DNA lanca se ne može sintetizirati.
    4. Potrebno je odabrati pravu okolinu za proučavanje, krv se uzima samo ako se sumnja da je zaražena (sepsa), nema potrebe za uzimanjem ispljuvka ako postoji pitanje tuberkuloze organa živčanog sustava. U ovom slučaju, PCR neće moći otkriti patogen i dijagnoza će biti neinformativna.

    Indikacije za otkrivanje tuberkuloze uz pomoć PCR analize

    PCR dijagnoza tuberkuloze provodi se najčešće u kontroverznim slučajevima. Kada liječnici upućuju ovu studiju?

    1. Ako je teško napraviti dijagnozu koristeći uobičajene dostupne metode, ali je došlo do kontakta s bolesnikom s tuberkulozom.
    2. U slučaju da se osoba ne može dostaviti u kliniku da bi se podvrgla rutinskim rutinskim testovima na tuberkulozu, lakše je pregledati ga PCR-om, jer se sputum za test može dostaviti u staklenku i dijagnoza se potvrdi u roku od nekoliko sati.
    3. Ako osoba ima hitnu operaciju i hitno je saznati je li bolestan od tuberkuloze.
    4. Ako je potrebno, trudnica je također bolje pregledati na tuberkulozu pomoću PCR-a, jer je metoda sigurna.
    5. Svaka osoba kojoj nije dijagnosticirana tuberkuloza potvrđena je bakteriološkim metodama i fluoroskopijom. To se događa kada je lezija u plućima neprimjetna u izravnoj slici, a osoba tijekom isporuke ispljuvka za studiju nije mogla slijediti preporuke za ispravno prikupljanje materijala. U tom slučaju, osoba je zabrinuta zbog svih simptoma karakterističnih za plućnu tuberkulozu.
    6. Kada postoje sumnje u rezultate Mantoux testa.
    7. Poželjno je napraviti PCR dijagnozu tuberkuloze u djece. Postupak je siguran, ne stvara dodatnu izloženost zračenju i učinkovit je u otkrivanju teško dijagnosticiranih oblika bolesti.

    Pravovremena dijagnoza tuberkuloze ključna je za pravilno propisano liječenje i smanjenje širenja bolesti. Često poznate metode otkrivanja bolesti nisu uvijek učinkovite. Stoga je danas PCR jedan od najpouzdanijih i najsigurnijih načina za otkrivanje infekcije u ranim fazama njegova razvoja.