Lančana reakcija polimeraze (PCR) za tuberkulozu

Tuberkuloza je jedna od najopasnijih bolesti od koje čovječanstvo pati stotinama godina. Iako su znanstvenici bili u stanju identificirati uzročnika i izmisliti antibiotike kako bi ga eliminirali, liječenje nije uvijek uspješno. Glavni razlog je dugo razdoblje latentnog ili latentnog oblika bolesti, koje može trajati nekoliko godina. Kasna dijagnoza značajno smanjuje pacijentove šanse za oporavak i puni život.

Što je PCR?

Za otkrivanje mikobakterije tuberkuloze u tijelu više od stotinu godina uspješno je korišten Mantoux test. Ostale metode su se dobro dokazale: bakteriološka kultura u umjetnom mediju, mikroskopija razmaza, ELISA. Međutim, veliki broj komplikacija i lažno pozitivnih rezultata, kao i trajanje nekih metoda, zahtijevali su uvođenje novih tehnologija u dijagnostičku metodologiju. Veliki napredak u području mikrobiologije bio je nastanak PCR analize za tuberkulozu. Već nekoliko desetljeća pokazuje svoju učinkovitost i naširoko se koristi za diferencijalnu dijagnozu različitih oblika tuberkuloze.

PCR analiza za tuberkuloznu ili polimeraznu lančanu reakciju je metoda detekcije DNA bakterija ili njihovih fragmenata, koja se temelji na povećanju molekula nukleinskih kiselina pod djelovanjem enzimske DNA polimeraze. Za pozitivan rezultat dovoljna je samo jedna molekula patogene DNA, pa se ova metoda smatra vrlo osjetljivom. Dijagnoza OCP u tuberkulozi učinkovitija je od sjetve mikobakterija u umjetnom okruženju, jer, za razliku od kulture, omogućuje razlikovanje divljih i cjepnih sojeva cijepljenih s BCG. Time se izbjegavaju lažno pozitivni rezultati i dijagnoza postaje točnija.

Prednosti PCR-a

PCR dijagnostika tuberkuloze omogućuje otkrivanje Kochovog bacila u bilo kojem biološkom okruženju organizma uz određivanje njihovog kvantitativnog sastava čak iu početnom stadiju bolesti, kada su mikobakterije u stanju hibernacije. Dijagnoza bolesti u latentnoj fazi omogućuje da se na vrijeme započne profilaktički tretman, da se spriječi razvoj žarišta upale u plućima i pojave komplikacija u drugim organima i sustavima. Osim toga, PCR test za tuberkulozu ima nekoliko prednosti:

• visoka specifičnost - 90-100%;
• visoka brzina - od 4 sata do 2 dana;
• visoka osjetljivost, osobito kod imunodeficijencije;
• diferencijalna dijagnoza.

Glavna prednost metode je u tome što dijagnoza CRC tuberkuloze u djece omogućuje razlikovanje diseminiranog oblika bolesti od ograničenog žarišta, čak i kod negativnih rezultata drugih testova. Diferencijalno testiranje omogućuje vam da odaberete pravi režim liječenja i povećate učinkovitost terapije.

Visoka specifičnost analize postiže se uklanjanjem unakrsnih reakcija s drugim molekulama nukleinskih kiselina, a visoka osjetljivost omogućuje otkrivanje mikobakterija čak iu malom volumenu prikupljenog materijala. PCR metoda sputuma za tuberkulozu ima najveću pouzdanost, njezina specifičnost doseže 100% u usporedbi s istraživanjem drugih bioloških materijala.

Poseban mehanizam PCR-a pruža široke mogućnosti za otkrivanje Koch-ovih štapića kod imunokompromitiranih pacijenata. Prema metodi analize, reakcija detektira antigene, tako da nije važno ako tijelo proizvodi antitijela na patogen, ili ne. Stoga je moguće dijagnosticirati ekstrapulmonalne oblike bolesti i uznapredovale slučajeve u bolesnika s netočnostima u imunološkom sustavu, što nije moguće drugim metodama.

Nedostaci metode

Unatoč brojnim prednostima i visokoj osjetljivosti testa, PCR za tuberkulozu može dati lažno negativan rezultat. Budući da se uzima vrlo mala količina biomaterijala za dijagnozu, činjenica da se patogen "skriva" u stanici ili upalni fokus nije isključena i ne oslobađa se izvan.

Osjetljivost ove metode kod djece je 25-80%. Na primjer, u randomiziranoj studiji u skupini bolesnika s klinički dokazanom dijagnozom, PCR test krvi na tuberkulozu dao je pozitivan rezultat samo u 50% bolesnika. S tim u vezi, prilikom testiranja djeteta na patogene mikobakterije nije moguće zamijeniti jednu dijagnostičku metodu drugom. Kako bi se u potpunosti provjerila odsutnost infekcije, potrebno je provesti sveobuhvatnu studiju na više načina odjednom.

Postupak prikupljanja

Glavni uvjet za pouzdanost PCR dijagnostike je usklađenost s pravilima za prikupljanje bioloških tekućina za analizu. Kontaminirani ili nepravilno prikupljeni materijal može uzrokovati netočne rezultate. Najčešći su analiza sputuma, krvi i urina, ali za dublju diferencijalnu dijagnozu možete uzeti uzorke iz sadržaja želuca, sinovijalne tekućine, cerebrospinalne tekućine, tekućine za ispiranje bronha, sperme, izlučivanja prostate.

PCR u urinu za tuberkulozu uzima se ujutro nakon vanjske genitalne higijene mokrenjem u sterilni spremnik. Tijekom postupka važno je ne dirati unutarnje stijenke spremnika kako bi se spriječio ulazak mikroorganizama treće strane. Žene koje žive normalan seksualni život svakako bi trebale staviti tampon u vaginu kako bi se izbjeglo otpuštanje treće strane.

Krvni test se uzima ujutro na prazan želudac, a PCR sputuma za tuberkulozu može se obaviti u bilo koje doba dana uz obveznu prethodnu oralnu higijenu. To je potrebno za uklanjanje ostataka hrane koji mogu ući u spremnik. Prilikom iskašljavanja sputuma, važno je spriječiti ulazak sline i sluzi iz nazofarinksa u spremnik, što može iskriviti podatke analize.

Proučavanje sadržaja želuca provodi se u bolnici rano ujutro, dok je sputum progutan preko noći u želucu. Kako bi se otkrila mikobakterija tuberkuloza, ova metoda čini trostruko zasijavanje, što najvjerojatnije omogućuje izoliranje Kochovog bacila.

Rezultati dekodiranja

Kvalitativna analiza PCR-a daje 2 vrste rezultata "otkrivenih" ili "neotkrivenih". Oni označavaju pozitivnu i negativnu presudu. Odgovor "otkriven" znači da je DNK infektivnog agensa prisutna u uzorku za testiranje, a sa 97% vjerojatnosti da je tijelo zaraženo tuberkulozom. Negativan rezultat ukazuje na odsutnost Kochove palice u uzorku biološkog materijala i 97% šanse da tijelo nema velik broj mikobakterija, a 60% da osoba nije zaražena.

Najveća specifičnost za dijagnozu tuberkuloze je krvni test i sputum. Uz pozitivan rezultat ukazuju na infekciju organizma, što zahtijeva hitne terapijske mjere. Studije drugih biomaterijala ne ukazuju na tijek bolesti, već samo na prisutnost stranih bakterija. To se događa kada je osoba nositelj bolesti, ali ne širi zarazu u okoliš i ne inficira zdrave ljude.

Kvantitativna PCR analiza se provodi rjeđe, a liječnik se bavi dekodiranjem njegovih rezultata. Pokazatelji istraživanja koriste se za određivanje aktivnosti bolesti i stupnja oštećenja organizma. Na temelju dobivenih podataka, stručnjak može odrediti učinkovitost liječenja i, ako je potrebno, prilagoditi terapijsku shemu.

Tuberkuloza je uvijek bila i ostaje jedan od najozbiljnijih problema za zdravlje cijelog čovječanstva. Moderne dijagnostičke metode mogu otkriti bolest u ranoj fazi kako bi se liječenje započelo na vrijeme. Tuberkulinski test, mikroskopija razmaza, kultura bakterija na umjetnim hranjivim medijima dokazali su se u području laboratorijske dijagnostike tuberkuloze. Međutim, dugo čekanje na rezultate i povećana učestalost lažno pozitivnih očitanja učinili su ih zastarjelim i doveli do izražaja naprednije tehnologije. PCR analiza je vrlo specifična i visoko učinkovita metoda za dijagnosticiranje tuberkuloze. Njegovi rezultati su najpouzdaniji među svim predloženim laboratorijskim metodama za otkrivanje Kochovih štapića. To omogućuje ne samo donošenje konačne presude, nego i provođenje potrebne diferencijalne dijagnoze.

PCR dijagnoza tuberkuloze u djece i odraslih: indikacije za

Svjetska zdravstvena organizacija prije 20 godina priznala je da je stopa širenja tuberkuloze izvan kontrole i dosegla razmjere epidemije. Od tada se situacija nije poboljšala. Svake se godine dijagnosticira više od milijun slučajeva bolesti, od kojih je gotovo četvrtina fatalna. U posljednjem desetljeću, stopa incidencije među djecom se povećala, većina oblika bolesti nije pogodna za standardnu ​​antibiotsku terapiju.

Danas je jedan od globalnih zadataka u medicini razvoj takvih dijagnostičkih metoda koje će omogućiti identifikaciju patologije prije početka izraženih kliničkih simptoma. Jedna od njih je lančana reakcija polimeraze (PCR) za tuberkulozu, koja pomaže u otkrivanju štapića koji uzrokuju kohove bolesti u krvi, sputumu i drugim biološkim tekućinama.

Dijagnoza tuberkuloze

Probirni testovi usmjereni su na otkrivanje bolesnika, nositelja tuberkuloze i sprječavanje širenja infekcije u društvu. Za djecu mlađu od 14 godina koristi se Mantoux test. To je imunološki test u kojem se subkutano ubrizgava doza tuberkulina - složena mješavina genetskog materijala nekoliko tipova mikobakterija. Pojava naglašene reakcije ukazuje na aktivno pojavljivanje infektivnog procesa.

Za preventivni pregled kod odraslih osoba koje koriste fluorografiju ili x-zrake. Ove metode pomažu vizualizirati patološke lezije u plućnom tkivu. Međutim, to uzrokuje poteškoće u razlikovanju tuberkuloze od druge organske patologije (maligne i benigne neoplazme, upalni procesi, parazitske invazije, profesionalno oštećenje pluća).

Kako bi se pojasnila struktura i veličina patološkog fokusa, mogu biti potrebne dodatne instrumentalne studije:

• ciljana radiografija;
• računalna tomografija;
• magnetska rezonancija.

Metode dijagnostike tuberkuloze

U slučaju sumnjivih rezultata i za određivanje adekvatne terapije, postoji potreba za točnijim dijagnostičkim metodama koje omogućuju izolaciju patogena. Mikroskopsko i bakteriološko ispitivanje sputuma koristi se za dugotrajno potvrđivanje plućnih oblika tuberkuloze.

Posljednjih godina učestalost mikobakterija različitih organa i sustava - bubrega, kostiju, crijeva, kože - postajala je učestalija. Za identifikaciju ovih oblika tuberkuloze mogu se koristiti ultrazvuk, urin i feces, te endoskopska ispitivanja.

PCR dijagnostika tuberkuloze pomoći će potvrditi prisutnost Koch štapića u krvi, kao i njegovu osjetljivost na određene lijekove. To je visoko učinkovita metoda koja se temelji na detekciji bakterijskog genetskog materijala u različitim biološkim tekućinama.

Specifičnost i indikacije

Lančana reakcija polimeraze vrlo je osjetljiva mikrobiološka dijagnostička metoda koja se temelji na načelima genetskog inženjeringa. Da bi se potvrdila prisutnost patogena u biološkom materijalu, dovoljno je detektirati jedinstveni fragment nukleinske kiseline za njega. PCR za tuberkulozu može otkriti bakterije u krvi, sputumu, urinu.

Trenutno je razvijeno nekoliko metoda analize. Najpopularnije među njima su sljedeće:

• PCR u stvarnom vremenu;
• mikrofluidna tehnologija;
• sekvenciranje i piro sekvenciranje.

PCR u stvarnom vremenu

Laboratoriji najčešće koriste lančanu reakciju polimeraze u stvarnom vremenu, jer smanjuje broj lažno pozitivnih rezultata, a sam proces analize traje kratko.

S obzirom na veliki broj skrivenih oblika bolesti i neučinkovitost standardnih dijagnostičkih metoda, PCR se sve više koristi. Svrha ove analize prikazana je na:

• identificiranje sumnjivih područja na X-zrakama;
• sumnjivi rezultati tuberkulinskog testa;
• nemogućnost provođenja mikroskopske i bakteriološke analize sputuma kod osoba u teškom stanju;
• provođenje kirurških intervencija kada je potrebno brzo osigurati da nema infekcije;
• nedopustivost upotrebe fluorografije, rendgenskih snimaka ili kompjutorske tomografije (na primjer, u trudnica i dojenja, u slučaju prekomjerne izloženosti zračenju);
• sumnja na ekstrapulmonarnu tuberkulozu (preporuča se koristiti ne samo krv, već i sluz).

PCR dijagnostika tuberkuloze dokazala se u ispitivanju djece zbog nedostatka dodatnog izlaganja i brzih rezultata.

Postupak pripreme i analize

Nije potrebna posebna priprema za PCR za krv. Međutim, kako bi se izbjegle komplikacije uzimanja uzoraka krvi i kako bi se dobio visokokvalitetni materijal, treba slijediti sljedeća opća pravila:

• analizu treba poduzeti ujutro ne ranije od 2 sata nakon buđenja;
• Trebalo bi ograničiti unos masne i pržene hrane dan prije uzimanja krvi;
• suzdržite se od jela, čaja i kave 8-9 sati, dopušteno je piti čistu vodu;
• Ne pušite najmanje 3-4 sata.

U slučaju trajnih lijekova (hormoni, antikoagulanti, protuupalni lijekovi, antibiotici, razrjeđivači krvi), trebali biste o tome obavijestiti laboratorijskog pomoćnika.

Nakon isporuke ispljuvka dobro treba dobro oprati zube i isprati usta nekoliko puta. Sakupiti materijal u sterilnom spremniku. Za bolje rezultate, navečer se može uzeti ekspektorans ili mukolitik.

Sama dijagnoza sastoji se od nekoliko faza.

Materijal ograde. Može se izvoditi u laboratoriju i na daljinu. Neke vrste materijala koje pacijent prikuplja samostalno (urin, sluz).

Uništavanje strukture nukleinskih kiselina (denaturacija molekula DNA i RNA). Za to se ispitni materijal zagrijava na temperaturu od 98 stupnjeva i drži nekoliko minuta. Kao rezultat toga, dvostruka spirala se odvija, nastaju jednolančane molekule.

Šala. Nakon dodavanja prajmera (kratki dio nukleinske kiseline), temperatura se smanjuje za nekoliko stupnjeva, aktivira se polimeraza.

Elognatsiya. Temperatura je dovedena do optimalne razine, aktivnost enzima dostiže maksimum, a drugi lanac je završen u skladu s Chargaffovim pravilom komplementarnosti.

Za dovršenje studije potrebno je sintetizirati potreban broj molekula DNA - oko 50 ciklusa gornje reakcije. Potrebno je oko 2-3 sata. Pozitivan rezultat reakcije ne ukazuje uvijek na aktivnu fazu bolesti, već je pokazatelj prisutnosti mikroorganizma u tijelu.

Prednosti i nedostaci metode

U usporedbi s drugim mikrobiološkim metodama, PCR ne uzima dugo vremena za otkrivanje Mycobacterium tuberculosis uz pomoć PCR-a, rezultat se može dobiti na dan testiranja.

Još jedna prednost je visoka specifičnost analize koja omogućuje otkrivanje prisutnosti patogena s točnošću od 90-95% u gotovo svim biomaterijalima (krv, urin, feces, cerebrospinalna tekućina, sputum, crvenilo bronha).

Međutim, postoji nekoliko nedostataka metode:

• prilično visok postotak lažno pozitivnih rezultata (do 15%), što je povezano s otkrivanjem neživih mikroorganizama;
• u nekim slučajevima možete preskočiti činjenicu bolesti, budući da je Mycobacterium tuberculosis često podvrgnut mutacijama i promjenama genetskog materijala;
• niska učinkovitost u ispitivanju osoba s imunodeficijencijom;
• visoki troškovi istraživanja, potreba za skupom opremom i reagensima.

Što se može zamijeniti?

S obzirom na raznolikost oblika tuberkulozne infekcije, za točniju dijagnozu i izbor liječenja potrebno je kombinirati nekoliko dijagnostičkih studija:

Obvezna analiza za djecu je Mantoux test. Ako se unošenjem tuberkulina (genetskog materijala mikobakterija) javi izražena reakcija, može se pretpostaviti infekcija bakterijom tuberkuloze.

Metode X-zraka mogu se koristiti za vizualizaciju patološkog fokusa. U dijagnostici ekstrapulmonalne tuberkuloze koriste se endoskopske metode uz istodobnu biopsiju:

• bronhoskopija pomaže identificirati lezije grkljana, dušnika, bronha;
• kolonoskopija - crijeva;
• cistouretroskopija - organi mokraćnog sustava;
• histeroskopija - ženske genitalije. Ove metode nisu specifične, za preciznu dijagnozu, patogen treba identificirati.

Opći klinički testovi pomoći će specifičnije odrediti stanje tijela. Potrebna je potpuna krvna slika s formulom leukocita.

Povećanje broja neutrofila s smanjenom razinom limfocita i povećanjem brzine taloženja eritrocita (ESR) ukazuje na aktivni upalni proces bakterijske etiologije. Isključiti oštećenje organa mokraćnog sustava općom analizom urina i kulturom sterilnosti.

PCR je trenutno dostupan u većini privatnih laboratorija. To zahtijeva ne samo visoko kvalificiranih stručnjaka, ali i skupe opreme, veliki broj reagensa. Stoga je uporaba ove metode ograničena unatoč visokoj točnosti i specifičnosti.

PCR analiza za dijagnozu tuberkuloze

Medicina nikada ne miruje, a dosadašnji napredak u zdravstvenom sektoru omogućuje dijagnosticiranje i liječenje mnogih prethodno nepromijenjenih bolesti. Postoje i bolesti koje se ne mogu otkriti vizualnim pregledom. Tuberkuloza je uvijek bila među njima. To je opasna zarazna bolest koja pogađa pluća, zglobove i kosti i često dovodi do smrti iu našim danima. Poboljšane su dijagnostičke metode za ovu bolest, što omogućuje otkrivanje bolesti u ranijim stadijima kada se može liječiti. Među njima nisu samo X-ray i Mantoux testovi, nego i PCR za tuberkulozu.

Tuberkuloza - što je to

Prije je tuberkuloza nazivana suha bolest ili phthisis. To je bakterijska infekcija koja najčešće pogađa pluća. Njegovi izvanplućni oblici - tuberkuloza kostiju i zglobova, tuberkulozni meningitis - manje su uobičajeni i napredniji stadiji. Uzročnik ove zarazne bolesti su mikobakterije. Tuberkulozni bacil se također naziva Kochov štapić.

Infekcija tuberkuloze je vrlo zarazna, prenosi se kapljicama u zraku prilikom kašljanja i kihanja pacijenta. Jedina zaštita protiv ove bolesti je cjepivo koje se dostavlja na vrijeme. Ne štiti od infekcije, ali ne dopušta bacilima da uđu u tijelo i uzrokuju tuberkulozu.

Oblici tuberkuloze

Bolest se može pojaviti iu otvorenom iu zatvorenom obliku. Razlike su sljedeće:

• zatvorena tuberkuloza je asimptomatska. U takvim okolnostima, Koch štap u sputumu je nemoguće otkriti, stoga zaraženo nije opasno za okoliš. Takav tijek bolesti obično ne ugrožava većinu zaraženih, ali postoje iznimke - u jednom desetom slučaju zatvorena tuberkuloza može ići u otvoreni oblik;
• s otvorenim oblikom, mikobakterije koje uzrokuju tuberkulozu nalaze se u pacijentovoj slini i sputumu. Inficirani organizam predstavlja veliku opasnost za društvo, čak iu izolaciji. U pravilu, bolest najprije pogađa pluća. Ako se ne dijagnosticira rano, može se javiti u drugim oblicima, kao što je tuberkuloza kostiju ili zglobova.

Otvoreni oblik tuberkuloze dijagnosticira se na različite načine. Pacijent se podvrgava rendgenskom snimanju prsnog koša ili rendgenskom snimanju prsnog koša, analizira njegov biološki materijal ili Mantoux test kože. Nedavno se pojavila druga metoda koja se smatra jednako učinkovitom - analizom lančane reakcije polimeraze (PCR).

Što znači PCR

U medicinskoj praksi, metode dijagnosticiranja ove ili one bolesti s otkrivanjem njezine DNA ili RNA u ljudskom tijelu već se dugo koriste. To je upravo PCR za tuberkulozu. To je vrlo precizna analiza krvi ili druge biološke tekućine, koja vam omogućuje da identificirate bakterije s minimalnom koncentracijom u odabranom materijalu, dovoljna je samo jedna stanica. Istraživanje se provodi pomoću posebnog enzima polimeraze.

Prednosti metode

PCR je dijagnostička metoda koja se pokazala s najbolje strane, pa se često koristi, u kombinaciji s drugim metodama i neovisno. Njegove prednosti:

• najkraćim uvjetima proizvodnje. Studija se provodi brzo, za oko 5 sati pomoću PCR-a može se detektirati prisutnost bacila tuberkuloze u biološkoj tekućini pacijenta. To je osobito istinito ako trebate provesti hitnu kiruršku intervenciju, a prije toga dobiti točnu dijagnozu;
• Događa se da su druge dijagnostičke metode kontraindicirane za pacijenta. Na primjer, X-zrake se ne mogu obavljati svima. Osim toga, sliku nije uvijek moguće dijagnosticirati, osobito ako je bolest u ranoj fazi. Uz pomoć PCR metode, patogen se odmah otkriva;
• Biološka tekućina svakog pacijenta prikladna je za analizu. PCR mokraće i sline za tuberkulozu se provodi radi identificiranja plućnih i vanplućnih oblika. Ispitivanje se također provodi pomoću pacijentove spinalne tekućine kako bi se otkrio tuberkulozni meningitis.
• Metoda je apsolutno sigurna. Da bi ga proveli, dovoljno je da dobijete biološku tekućinu od pacijenta. PCR dijagnostika tuberkuloze u djece prikladna je i bezopasna, jer je rendgenski pregled dopušten tek u dobi od 18 godina, a Mantoux test ponekad uzrokuje nuspojave;
• PCR je visoko osjetljiva analiza. Omogućuje vam da identificirate Koch štapiće s minimalnom koncentracijom mikobakterija;
• Pomoću posebnog enzima polimeraze dijagnoza je dijagnosticirana u bilo kojoj fazi, od ranog do naprednog;
• ova metoda je učinkovita u dijagnosticiranju recidiva bolesti;
• Ova metoda je proboj u izradi točnih dijagnoza u ranim stadijima bolesti. To vam omogućuje da započnete liječenje u najkraćem mogućem vremenu i uništite patogene, kada još nisu imali nepovratni negativan utjecaj na organe i sustave ljudskog tijela.

Gdje napraviti PCR analizu za tuberkulozu

Iako je PCR analiza za tuberkulozu vrlo učinkovita metoda za dijagnosticiranje ove bolesti, ona se rijetko koristi sama od sebe. To je u pravilu dodatna metoda otkrivanja tuberkuloze i koristi se rijetko. Činjenica je da je ova metoda prilično skupa.

Javne klinike nemaju priliku kupiti posebnu opremu za obavljanje PCR analize, a vlada ne vidi smisao financiranja ovog članka, jer se tuberkuloza može dijagnosticirati na druge načine. Takva se studija najčešće provodi u privatnim klinikama koje mogu priuštiti kupnju potrebne opreme.

Nedostaci metode

Visoka cijena nije jedini nedostatak PCR-a. Osim visokih troškova, metoda ima i druge nedostatke i nedostatke, na primjer:

• PCR za tuberkulozu daje pozitivan rezultat čak i nakon tretmana, budući da mrtve stanice uzimaju kao žive bakterije, pa ova metoda nije prikladna kao kontrolni pregled pacijenta kako bi potvrdio oporavak;
• tuberkulozni bacili mutiraju, a njihova se DNA modificira, što može utjecati na pouzdanost rezultata;
• PCR test krvi na tuberkulozu se rijetko provodi, jer je prisutnost Kochova štapića u tim biološkim tekućinama vrlo teško detektirati. To je moguće samo u posljednjim fazama ili u sepsi. Obično se pacijent uzima sputum za dijagnozu;

Važno je napomenuti da je najtočniji rezultat upravo prikupljanje sadržaja želuca pacijenta. Ako se sumnja na plućnu tuberkulozu, kultura sputuma će biti najučinkovitiji način dijagnosticiranja bolesti. Ako pacijent ima izvanplućni oblik, u tom biološkom okolišu ne može biti bakterija. Da bi se utvrdila tuberkuloza kostiju, zglobova i sl. Pomoću PCR-a potrebna je druga biološka tekućina, na primjer, spinalna tekućina.

Kako je PCR za tuberkulozu

Kao što je ranije opisano, bit PCR analize je identificirati patogenu DNA u biološkoj tekućini pacijenta reakcijom polimeraze. Glavne faze metode:

1. Uzorkovanje biološkog materijala. PCR nije samo hemotest - proučavana biomasa može biti slina, urin, cerebrospinalna tekućina, tekućina za pranje bronha, sadržaj želuca, sputum.
2. Nakon toga, biomasa je izložena visokim temperaturama kako bi uništila DNA strukturu patogena.
3. Tada se temperatura postepeno smanjuje i prajmer se veže na uništeni element DNA.
4. Prema rezultatima molekularne sinteze, koja traje oko 30 ciklusa, otkriva se ili određuje odsutnost određenog patogenog bakterija.

Ova analiza zahtijeva dobro financiranje, tako da se PCR ne radi često. Međutim, ova metoda nema jednakih, kada su druge dijagnostičke opcije zabranjene, ili u slučaju nužde, kada nema vremena za čekanje na rezultat.

Ukratko

U zaključku možemo izvući sljedeće zaključke:

• PCR je visoko točna analiza koja može otkriti tuberkulozu nekoliko dana nakon infekcije;
• ova analiza se radi za 3,5 do 5 sati, tako da je u slučaju kada račun ide na sat, nezamjenjiv;
• to je sigurna metoda koja nema nuspojava;
• Koristi se kada su druge dijagnostičke metode pokazale nedosljedne rezultate ili je njihova uporaba kontraindicirana.

Međutim, PCR se rijetko radi, jer je to skupa analiza koja zahtijeva ugradnju posebne opreme. Osim toga, nije uvijek informativan, pa stručnjaci ovu metodu otkrivanja tuberkuloze koriste kao dodatnu.

PCR analiza (dijagnoza) tuberkuloze

Tuberkuloza ili konzumacija - jedna od najpopularnijih zaraznih bolesti 21. stoljeća. Njegovi patogeni su posebne mikrobakterije - Koch štapići.

Bolest se širi ne samo na pluća, već i na mozak, probavu, zglobove ili kralježnicu, mokraćni sustav i kožu.

Prema WHO, 10 milijuna ljudi svake godine pati od tuberkuloze, od kojih je 3 milijuna fatalno.

Situacija je posebno tužna na području zemalja ZND-a, ovdje se povremeno javljaju tuberkulozne epidemije. Rusiju, Kazahstan, Ukrajinu predvodi tužna ocjena o širenju ove infekcije.

Infekcija se lako prenosi putem kapljica u zraku ili kroz probavni sustav, utječe na vitalne organe, a također se može brzo prilagoditi polimernim lijekovima i kemoterapiji.

Jedan od glavnih čimbenika uspješnog liječenja tuberkuloze je pravodobno otkrivanje infekcije.

Dijagnostičke metode

Čovječanstvo je izmislilo mnoge metode za prepoznavanje opasne bolesti. Dijagnoza tuberkuloze podijeljena je na instrumentalnu i laboratorijsku.

U prvom slučaju, krvni test za tuberkulozu, kao i sputum, urin.

Druga skupina je studija pomoću rendgenske i endoskopije. Instrumentalne metode za dijagnosticiranje tuberkuloze su pak radijacijske i kirurške.

Vrste zračenja u pronalaženju bolesti

• Fluorografija je metoda dijagnosticiranja bolesti koja je poznata svakom stanovniku CIS-a. Pomoću x-zraka, pregledavaju se pluća i hilarni limfni čvorovi.
• Rendgenski snimak prsnog koša - sličan fluorografiji, ali bolji način otkrivanja infekcije. Slika se dobiva detaljnije iu dvije projekcije, ali ovaj postupak je oko šest puta skuplji. Obično se koristi nakon ozbiljne sumnje na bolest.
• Kompjutorizirana tomografija provodi se kao dodatna dijagnoza, a koristi se i nakon dobrog razloga za prisutnost infekcije.

Kirurške metode dijagnostike uključuju bronhijalnu endoskopiju, kao i medijastinoskopiju i torakokoskopiju.

Prva metoda je proučavanje bronhijalnog stabla pluća uz pomoć "sonde" u ovom organu. Preostale dvije metode omogućuju proučavanje pleuralnog dijela pluća punkcijom prsnog koša.

Sve tri metode su ozbiljna kirurška intervencija i najčešće se koriste u procesu progresije bolesti.

Laboratorijska ispitivanja uključuju:

• Analiza sputuma za bacil tuberkuloze.
• Mikroskopsko ispitivanje.
• PCR dijagnoza tuberkuloze

Što je PCR dijagnoza?

Jedna od najnaprednijih metoda laboratorijske dijagnostike infekcija stručnjaci nazivaju lančana reakcija polimeraze.

Ovu metodu razvio je poznati američki znanstvenik Carrie Mullis 1983. godine, za koji je dobio Nobelovu nagradu.

PCR analiza je izolacija DNA čestica iz sputuma, krvi, cerebrospinalne tekućine, fecesa itd. za njihovu kasniju biosintezu.

Uz pomoć složene molekularno-genetičke studije određuje se priroda mikroba u tijelu pacijenta.

Ova vrsta analize za tuberkulozu provodi se u nekoliko faza:

• Prvo se uzimaju biološki uzorci. Materijali se stavljaju u posebne spremnike i šalju u laboratorij.
• U istraživačkom centru analize se zagrijavaju na 97 stupnjeva. To omogućuje da se uništi struktura genoma DNA mikroorganizama, koji se sastoji od nekoliko lanaca.
• Temperatura se specifično spušta tako da se početnice (DNA sudionici od kojih započinje proces biosinteze) mogu povezati s bilo kojim lancem deoksiribonukleinske kiseline.
• Nakon toga se provodi biosinteza molekula potrebnih za detekciju.

Nakon 25-30 ponovljenih ciklusa u laboratorijskom istraživanju, liječnici imaju mogućnost prepoznati jesu li infektivni mikroorganizmi prisutni u tijelu pacijenta ili ne.

Prednosti i nedostaci

PCR za tuberkulozu je najmodernija dijagnostička tehnika. Metoda omogućuje detekciju infekcije u bilo kojoj fazi s visokom pouzdanošću. prednosti:

• Brzina - studija traje ne više od pet sati. Rezultati testa na mikrobe tuberkuloze mogu se naći u roku od 24 sata.
• Sigurnost - PCR metoda nema starosne kontraindikacije.
• Pravovremenost - ova tehnika vam omogućuje da otkrijete tuberkulozu u onim fazama kada bolest nema simptoma.
• Visok stupanj točnosti - ako je u analizama samo nekoliko mikroorganizama, oni će biti pronađeni pomoću lančane reakcije polimeraze. Također, ova tehnika omogućuje da se lako identificira uzročnik tuberkuloze.
• Svestranost - dijagnostika se koristi ne samo za otkrivanje potrošnje, već i za druge bolesti kao što su klamidija, gonoreja, itd.

Usprkos brojnim prednostima, primjena ove tehnike u domaćoj medicinskoj praksi prije je izuzetak nego pravilo. Za to postoji više razloga.

Nedostaci ove metode su:

• Visoki troškovi istraživanja.
• Metoda nije pogodna za one koji su podvrgnuti terapiji, budući da prisutnost mrtve bakterije Koch može dovesti do lažno pozitivnog rezultata.
• U slučaju mutacije infektivnih mikroorganizama, njihov se genom ne može prepoznati pogrešnim zaključkom.
• Važno je odabrati pravo okruženje za otkrivanje. Na primjer, rezultat analize krvi za PCR za tuberkulozu (razrjeđenje) bit će negativan ako je živčani sustav zaražen.
• Nije uvijek moguće primijeniti ovu metodu na pacijente kojima je dijagnosticirana plućna lezija.

Osim toga, takva analiza za tuberkulozu zahtijeva modernu opremu koju 90 posto bolnica nema. U CIS-u takvu analizu može provoditi mreža klinika Invitro.

Uvjeti analize

Preporuke za pacijente koji se podvrgavaju takvom testu na tuberkulozu razlikuju se ovisno o vrsti analize koju prolaze.

Prilikom uzimanja krvi za PCR potrebno je suzdržati se od pušenja sat vremena prije zahvata, dva sata - kako bi se isključio alkohol i masna hrana.

Također se preporuča da se suzdržite od fizičkih napora, također je nemoguće uzimati krv za tuberkulozu na prazan želudac.

Kada uzimate bris iz usta i nosne šupljine, ne možete jesti 2-4 sata prije zahvata, inače neće biti informativan. Također, nemojte piti alkohol.

Za točnu analizu nije dopušteno pušiti prije sat vremena prije postupka. Uoči, suzdržite se od pranja zubi i prskanja usta.

Ako sumnjate na tuberkulozu urogenitalnog sustava, pacijentu 2-3 dana prije porođaja treba isključiti spolni odnos, 2-3 sata prije zahvata, ne idite na toalet “na mali način”. Genitalne organe treba oprati običnom vodom bez posebnih sredstava.

Ženama se savjetuje da ne koriste vaginalne tablete, svijeće, kuglice i da se suzdrže od testiranja u kritičnim danima.

5 dana prije porođaja, rezultat je potrebno napustiti postupak kolposkopije, kao i transvaginalni ultrazvuk,

Kada se koristi PCR dijagnostika?

Nije svaka klinika ima tako složenu dijagnozu, ali liječnici sve više pribjegavaju takvim metodama istraživanja. Obično se ovakva analiza provodi u posebnim situacijama.

• U slučaju sumnjivih rezultata manta, može se upotrijebiti krvni test za tuberkulozu.
• U slučajevima kada je pacijent bio u kontaktu sa zaraženom osobom, ali liječnik ne može točno odrediti dijagnozu.
• U slučaju hitne operacije, kada je potrebno u kratkom vremenu saznati ima li pacijent infekciju.
• Kada je pacijent trudna, kada druge metode istraživanja nisu dovoljno sigurne za novorođenče.

Valja napomenuti da se ova dijagnoza preporučuje djeci zbog njene sigurnosti.

Ako student ima kontraindikacije protiv tuberkulinskog testa, može uzeti PCR za testiranje tuberkuloze umjesto na plašt.

PCR analiza za tuberkulozu

PCR analiza za tuberkulozu je najpopularnija među medicinskim istraživanjima na području ove bolesti.

Ali kako upozoriti sebe i svoje najdraže na ovu strašnu bolest? Kako proći potrebne testove za PCR?

Simptomi tuberkuloze i njezina prevencija

Stručnjaci kažu da oko 30% ukupnog stanovništva pati od tuberkuloze.

Najveći postotak bolesti razvijen je u nerazvijenim zemljama. To se najčešće javlja kao posljedica smanjenog imuniteta kod ljudi.

Bolest je jedna od najstarijih. Ova se bolest može naći u sluznici mozga, u probavnom traktu, na zglobovima i kralježnici, u mokraćnom sustavu i na malim područjima na ljudskoj koži.

Stručnjaci najlakše određuju zahvaćenu kožu. Na mjestu postoje male brtve, koje s vremenom povećavaju veličinu, izbijaju se s bijelom tekućinom.

Uzročnik tuberkuloze najčešće se može pokupiti kada razgovara s bolesnom osobom, kada kašlje ili kiše. Obično se bolest odvija bez simptoma ili otvorenog oblika, ali PCR dijagnoza tuberkuloze omogućuje otkrivanje u ranim stadijima i u hitnim slučajevima.

Simptomi bolesti: produljeni mokri kašalj, groznica, zimica, prekomjerno znojenje noću, oštar gubitak težine, osjećaj umora i slabosti.

Otvoreni oblik bolesti je najopasniji. Osoba koja boluje od tuberkuloze može zaraziti zdrave ljude.

Najvažniji simptom plućne bolesti je hemoptiza. Pojavljuje se u bilo kojem obliku bolesti.

U nekim situacijama to može dovesti do krvarenja iz pluća osobe. Vrlo je opasno i zahtijeva hitnu medicinsku intervenciju.

Za sprječavanje i prepoznavanje tuberkuloze stručnjaci propisuju: uzorak - tuberkulinski test, pregled biološkog materijala, fluorografiju, rendgenske snimke i krvni test, sputum ili slinu.

Dijagnoza bolesti

Poboljšana dijagnoza bolesti - to je ispravna i tijekom liječenja započeta. U većini slučajeva uobičajene metode otkrivanja patogena ne djeluju uvijek i već su zastarjele.

Najvažniji način da se identificiraju i dijagnosticiraju plućne bolesti su medicinski pregledi. Obično se koristi PCR dijagnostika. Ovo istraživanje je nedavno otkrio američki biokemičar Mullis 1983. godine.

Test kod bolesnika s plućnom tuberkulozom provodi se isključivo u posebnim slučajevima kada je teško ustanoviti dijagnozu ili je nemoguće otkriti bolest na instrumentalni način.

Lančana reakcija polimeraze je pouzdana PCR metoda. Ova analiza omogućuje određivanje uzročnika u količini tekućine u krvi, urinu i leđnoj moždini. Takav liječnički pregled je najsigurniji.

PCR analiza daje 100% rezultat.

Ima visoku osjetljivost, što pomaže u prepoznavanju bolesti prvi put nakon infekcije, prije pojave simptoma bolesti. Ova metoda analize daje rezultat u roku od nekoliko sati nakon isporuke biološkog materijala. Sjetva ove analize izvodi se tri puta, ali aspiracija oboljelog želuca provodi se samo u bolnici.

Razvijeni su tri kriterija za određivanje rezultata: visoka točnost, osjetljivost do 90%, specifičnost.

Test za PCR koristi se u nekim slučajevima:

1. dijagnosticirati plućnu tuberkulozu;
2. odrediti izvor bolesti;
3. definicija ekstrapulmonalne lokalizacije;
4. dijagnoza recidiva.

Ocijenite rezultat, i propisati ispravan medicinski tretman, može samo specijalist. Vrlo je važno odrediti ispravnu shemu liječenja za otkrivanje tuberkuloze, potrebno je provesti test osjetljivosti patogena na anti-tuberkulozne uređaje.

Različiti medicinski testovi na tuberkulozu

Potrebnu analizu možete poduzeti na dva načina: uzmite krv ili slinu od osobe ili uzmite ispljuvak.

Testovi krvi pomoću PCR-a mogu biti dva tipa: ELISA i PCR. Takva studija pomaže u praćenju učinkovitosti liječenja.

ELISA pomaže u pronalaženju antitijela u ljudskom tijelu koja se odupiru tuberkuloznim mikroorganizmima. Ova se studija provodi jednom dnevno. Glavni nedostatak je njegova niska osjetljivost, koja omogućuje određivanje samo bolesti s niskom razinom infekcije.

Najpopularnije i najučinkovitije istraživanje je analiza na mikobakteriji tuberkuloze. S njom liječnici mogu lako pronaći DNK bakterija u ljudskoj krvi. Ova metoda se također koristi za određivanje broja bakterija, za kontrolu liječenja pacijenta, za otkrivanje rane recidiva.

PCR slina je jedna od najnaprednijih metoda istraživanja. Takva analiza pomoći će identificirati infektivne bakterije u slini. PCR povećava broj DNA fragmenata štetnih mikroba.

Kulturna metoda namijenjena je ispitivanju ljudskog sputuma za otkrivanje mikrobakterija.

Priprema za PCR testiranje

Pažnja, potrebna je ispravna priprema sline za PCR. Ako se ne poštuju svi propisi, analiza može biti lažno pozitivna.

Prije početka testa zabranjeno je pušiti, uzimati hranu i lijekove te konzumirati alkohol 12 sati. Zabranjeno je četkanje zubi, ne može se koristiti sredstvo za ispiranje, osvježivač usta i zubni konac.

Zabranjeno je koristiti ruž za usne i ulaziti u intimne odnose. Dopušteno je ispiranje usta običnom prokuhanom vodom;

Ovaj pregled pomoći će da se identificiraju: herpes, klamidija, tuberkuloza, uzročnici upale pluća, onkovirusi, barolleoza, mononukleoza, HIV, hepatitis svih vrsta, rubeole.

Analiza mikobakterija uglavnom se provodi u kontroverznim slučajevima, odnosno ako je teško postaviti dijagnozu ili je došlo do kontakta s bolesnikom s tuberkulozom, prije početka operacije, radi otkrivanja bolesti. Koristi se za pregled trudnice, jer je ova metoda najsigurnija za majku i fetus.

Ponekad se analiza provodi u privatnoj klinici, jer se pacijent nije pridržavao pravila za testiranje, ali je istovremeno zabrinut zbog svih simptoma. Analiza se može provesti kada stručnjaci nisu sigurni nakon provedbe Mantoux testa ili je pacijent dijete.

Prednosti i nedostaci medicinskih testova za određivanje tuberkuloze

PCR je najpopularniji i najučinkovitiji način za određivanje bolesti.

Najveća razlika u odnosu na druge studije je brz i točan rezultat.

Prednost ovog liječničkog pregleda je u tome što se može izvesti za urološke, ginekološke, onkološke, infektivne, hematološke, plućne, gastroenterološke i druge studije.

Glavna prednost takve medicinske studije je da su krvni testovi, sputum i slina spremni za kratko vrijeme (potrebno je 5 sati da se bolest otkrije). Takav liječnički pregled omogućuje provođenje testova kada su određene metode proučavanja bolesti zabranjene ili nedostupne. Izvrstan za otkrivanje recidiva kod ljudi.

Zahvaljujući ovoj analizi, postalo je moguće provesti istraživanje za bilo koji biološki okoliš. Dopušteno je uzimanje materijala od djece. PCR omogućuje identificiranje uzročnika u bilo kojoj fazi bolesti. Zbog svoje visoke osjetljivosti, mikrobi se mogu naći čak i ako je prisutno samo nekoliko bakterija.

PCR metoda proširuje njegove mogućnosti. Također se koristi za određivanje očinstva, za proizvodnju novih gena, mutacije, za križanje DNA elemenata i tako dalje.

Nedostaci ove studije su skupa metoda istraživanja.

Nakon liječenja, krvni test može pokazati prisutnost živih ili mrtvih patogena u malim količinama, nakon liječničkog pregleda, to će dati pozitivan rezultat.

Bakterije i mikrobi se mogu podvrgnuti mutaciji, nakon čega ih PCR neće moći identificirati i identificirati, stoga samo stručnjak može propisati proučavanje potrebne okoline, inače će takav medicinski pregled biti neučinkovit.

Nakon testiranja dolazi do negativnog rezultata, ali to ne isključuje mogućnost da je osoba zaražena tuberkulozom. Takav liječnički pregled provodi se za bolesnike s teškim bolestima pluća, kada bilo koje druge studije ne daju točne rezultate. PCR će biti korisna osobama s plućnom i vanplućnom tuberkulozom.

Nažalost, medicinska oprema za otkrivanje patogena tuberkuloze je vrlo skupa.

Javne bolnice i klinike to ne mogu priuštiti, ali plaćene klinike uzimaju testove pacijenata i pružaju gotove rezultate u kratkom vremenu.

PCR dijagnoza tuberkuloze

Tuberkuloza je specifična infekcija, njen fokus može biti u ljudskim tkivima godinama, a zatim se širiti nekoliko mjeseci. To je kronična bolest čiji je optimalni režim liječenja teško odabrati. Jedan od razloga za to je i kasna dijagnoza, kada su se mikobakterije, dok su u ljudskom tijelu, već prilagodile mnogim lijekovima.

Koje suvremene metode dijagnoze postoje? PCR dijagnostika - što je to? Kako se ovo istraživanje radi? U kojim slučajevima je tuberkuloza dijagnosticirana ovom metodom i koja je njezina bit?

Što je PCR dijagnostika

To je jedna od najmodernijih metoda dijagnosticiranja ne samo bolesti, već i otkrivanja biološkog materijala. PCR dijagnostika je izumljena relativno nedavno. Prije otprilike 30 godina, 1983. godine, američki biokemičar, Carey Banks Mullis, predložio je kompleksnu shemu oporavka biološkog materijala mikroorganizama u jednom kratkom segmentu. Zahvaljujući otkriću, znanstvenik je nagrađen najvišom nagradom - Nobelovu nagradu.

Što je to - PCR dijagnostika infekcija? Lančana reakcija polimeraze (PCR) je dijagnoza otkrivanja virusnih bolesti, koja se temelji na metodama genetskog inženjeringa. Široko se primjenjuje u medicinskoj mikrobiologiji, imunologiji i virologiji. Metoda je univerzalna i pomaže u postavljanju dijagnoze s malom količinom materijala. Infekcija se može otkriti doslovno u prvim satima infekcije, mnogo prije pojave prvih simptoma bolesti.

Metoda se sastoji od dobivanja iz materijala bolesne osobe ne samog patogena, već fragmenata genoma (čestica DNA), njegove biosinteze s naknadnim utvrđivanjem kojoj klasi mikroorganizama pripada dobiveni genetski materijal pomoću molekularno genetskih metoda.

Unatoč činjenici da je riječ o složenom procesu, potrebno je mnogo manje vremena nego mnogi biološki načini otkrivanja infektivnih agenasa. Unutar samo nekoliko sati, mikroorganizam se može detektirati PCR-om. Da bi se to postiglo, nema potrebe da se izolira iz okoline (krv, cerebrospinalna tekućina, sputum) i dugo se uzgaja na umjetnim hranjivim medijima. Dovoljno je da mali dio DNA lanca infektivnog agensa bude prisutan u ispitivanom materijalu.

Osnova reakcije je mogućnost u umjetnim uvjetima (in vitro) da stvori sintezu molekula nukleinske kiseline infektivnog agensa.

Što je potrebno za PCR?

1. Prajmeri su segmenti DNA iz kojih počinje biosinteza ili stvaranje.
2. Nukleotidi ili kompleksni spojevi koji čine bazu DNA ili RNA molekule.
3. Lančana reakcija polimeraze je nemoguća bez prisutnosti polimeraze, koja je enzim koji ubrzava PCR.

Faze PCR dijagnostike

Kako se molekularna dijagnostika provodi pomoću PCR-a? Postupak je jednostavan i kratko traje, uzimajući u obzir prikupljanje materijala.

1. Prije početka istraživanja uzimaju potreban biološki materijal - to je voda za pranje bronha, krv, sadržaj želuca, ispljuvak. Vrsta biološkog materijala ovisi o sumnjivom patogenu.
2. Denaturacija ili uništenje primarne strukture DNA koja se sastoji od dva lanca. Suština ove faze je razdvajanje dva kruga pod utjecajem visoke temperature (maksimum je 98 ºC, koji traje ne više od dvije minute).
3. U sljedećoj fazi PCR-a, zvana žarenje, temperatura se smanjuje za nekoliko stupnjeva tako da se prajmer veže za lanac DNA.
4. Izduženje, tijekom kojeg se sinteza željenih molekula odvija izravno.

Kao rezultat, samo 25-30 takvih ciklusa dobiva potreban broj kopija DNA mikroorganizama, koje je lako prepoznati.

Da li PCR zahtijeva dijagnozu tuberkuloze?

Nije moguće da apsolutno sve osobe sa sumnjom na tuberkulozu izvedu PCR, jer metoda zahtijeva skupu opremu. Nisu sve javne klinike u mogućnosti kupiti. Osim toga, dogodilo se da se uobičajene metode dijagnosticiranja infekcije u većini slučajeva i opravdavaju.

To uključuje:

• istraživanje pacijenta, uzimanje povijesti;
• potpuni pregled osobe;
• istraživanje pomoću Mantoux tuberculin testa;
• radiografija ili fluorografija;
• računalna dijagnostika, ako je potrebno;
• mikrobiološke metode istraživanja: mikroskopija razmaza i bakteriološko ispitivanje sputuma.

PCR za tuberkulozu provodi se u posebnim slučajevima kada je teško postaviti dijagnozu ili nije moguće provesti druge instrumentalne metode.

Usprkos obilju dijagnostičkih metoda, incidencija tuberkuloze i dalje raste. Trenutno ne postoji samo njegov rast, nego i druge značajke:

• bolest se često javlja u teškom obliku;
• povećava se broj smrtnih slučajeva;
• sve otporniji na modernu kemoterapiju dijagnosticiraju se oblici bolesti.

Nevoljkost ljudi da se godišnje podvrgavaju rutinskim liječničkim pregledima, odbacivanje cijepljenja dovodi do širenja tuberkuloze. U takvim uvjetima potrebne su brze, informativne i učinkovite metode istraživanja koje trebaju biti dostupne djeci i odraslima. Sve gore navedene dijagnostičke metode mnogo su slabije od PCR-a.

Prednosti dijagnosticiranja tuberkuloze uz PCR

Ovo istraživanje, iako novo, pokazalo se dobro, pogotovo u kontroverznim slučajevima u kojima je nemoguće postaviti dijagnozu iz više razloga.

Zahvaljujući PCR-u mnogo je lakše detektirati uzročnika tuberkuloze u ispitivanom materijalu.

Prednosti PCR dijagnostike su sljedeće.

1. Ovo je brza analiza. Mali fragment molekule DNA može se koristiti za dijagnosticiranje u samo nekoliko sati (oko pet), koji se uspješno koristi u izvanrednim situacijama kada je, primjerice, prije operacije potrebno utvrditi je li osoba bolesna od tuberkuloze.
2. PCR analiza je dopuštena u slučaju kada druge metode nisu dostupne ili zabranjene (za otkrivanje plućne tuberkuloze, ponekad morate uzeti nekoliko radiografskih snimaka, što će biti velika doza zračenja).
3. Uz pomoć PCR-a ispituje se bilo koje biološko okruženje na prisutnost patogena u njemu. Na primjer, možete provesti istraživanje cerebrospinalne tekućine, ako postoji sumnja na tuberkulozni meningitis.
4. Dozvoljena je PCR dijagnoza infektivnih bolesti u djece, jer je metoda sigurna.
5. Omogućuje identifikaciju patogena u bilo kojoj fazi bolesti.
6. Visoka osjetljivost PCR-a omogućuje otkrivanje Mycobacterium tuberculosis, čak i ako u biološkom materijalu postoji samo nekoliko mikroorganizama.
7. Dobro je izvršiti dijagnozu recidiva bolesti.

Nakon svega čitanje PCR-a čini se gotovo savršenom dijagnostičkom metodom, koja bi svakoga trebala učiniti sumnjivom na tuberkulozu. No, tu su i nedostaci, oni se moraju uzeti u obzir.

Nedostaci PCR u dijagnostici tuberkuloze

U naše vrijeme takva je dijagnostika rjeđa od pravilnosti. I za to postoji razlog.

1. To je skupa metoda istraživanja. U mnogim klinikama oprema za PCR nije prisutna zbog visokih troškova, ali se analiza još uvijek može obaviti u plaćenim laboratorijima.
2. Odmah nakon liječenja, mrtve mikobakterije ili živi u malim količinama mogu još uvijek biti prisutni u ljudskom tijelu (rezultat će biti pozitivan tijekom PCR dijagnostike), pa će metoda u ovom trenutku biti nepouzdana, nema smisla provoditi je.
3. Mutacije mikobakterija rezultiraju neučinkovitim PCR-om - normalna sekvenca DNA lanca se ne može sintetizirati.
4. Potrebno je odabrati pravu okolinu za proučavanje, krv se uzima samo ako se sumnja da je zaražena (sepsa), nema potrebe za uzimanjem ispljuvka ako postoji pitanje tuberkuloze organa živčanog sustava. U ovom slučaju, PCR neće moći otkriti patogen i dijagnoza će biti neinformativna.

Indikacije za otkrivanje tuberkuloze uz pomoć PCR analize

PCR dijagnoza tuberkuloze provodi se najčešće u kontroverznim slučajevima. Kada liječnici upućuju ovu studiju?

1. Ako je teško napraviti dijagnozu koristeći uobičajene dostupne metode, ali je došlo do kontakta s bolesnikom s tuberkulozom.
2. U slučaju da se osoba ne može dostaviti u kliniku da bi se podvrgla rutinskim rutinskim testovima na tuberkulozu, lakše je pregledati ga PCR-om, jer se sputum za test može dostaviti u staklenku i dijagnoza se potvrdi u roku od nekoliko sati.
3. Ako osoba ima hitnu operaciju i hitno je saznati je li bolestan od tuberkuloze.
4. Ako je potrebno, trudnica je također bolje pregledati na tuberkulozu pomoću PCR-a, jer je metoda sigurna.
5. Svaka osoba kojoj nije dijagnosticirana tuberkuloza potvrđena je bakteriološkim metodama i fluoroskopijom. To se događa kada je lezija u plućima neprimjetna u izravnoj slici, a osoba tijekom isporuke ispljuvka za studiju nije mogla slijediti preporuke za ispravno prikupljanje materijala. U tom slučaju, osoba je zabrinuta zbog svih simptoma karakterističnih za plućnu tuberkulozu.
6. Kada postoje sumnje u rezultate Mantoux testa.
7. Poželjno je napraviti PCR dijagnozu tuberkuloze u djece. Postupak je siguran, ne stvara dodatnu izloženost zračenju i učinkovit je u otkrivanju teško dijagnosticiranih oblika bolesti.

Pravovremena dijagnoza tuberkuloze ključna je za pravilno propisano liječenje i smanjenje širenja bolesti. Često poznate metode otkrivanja bolesti nisu uvijek učinkovite. Stoga je danas PCR jedan od najpouzdanijih i najsigurnijih načina za otkrivanje infekcije u ranim fazama njegova razvoja.